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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助NASBA实验
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苏琬

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助NASBA实验 已有1人参与

用NASBA做RNA实验，一直做不出来，我用分子信标做溶解曲线，阳性和阴性78℃都有小峰，什么原因，求楼主们指导

@biostar2009 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼 2021-07-28 12:37:08
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个不是应该42°C看是否产生荧光信号吗，或者说看阴性和阳性是否产生差异性的荧光信号？

分子信标在78°C会解开双链，产生荧光啊，这个和阴性或阳性没有关系啊
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2021-07-28 16:33:53
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苏琬

新虫 (初入文坛)
前辈，NASBA分子信标法求指教，T7启动子聚合酶序列不同吗？程序：65℃ 5min，41℃ 5min；加入酶；41℃  1min进行90cycles同时收集荧光。请问程序对吗？

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3楼2021-07-30 21:09:31
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苏琬

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2021-07-28 16:33:53
这个不是应该42°C看是否产生荧光信号吗，或者说看阴性和阳性是否产生差异性的荧光信号？

分子信标在78°C会解开双链，产生荧光啊，这个和阴性或阳性没有关系啊

前辈，NASBA分子信标法求指教，T7启动子聚合酶序列不同吗？程序：65℃ 5min，41℃ 5min；加入酶；41℃??1min进行90cycles同时收集荧光。请问程序对吗？

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4楼2021-07-30 21:13:37
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个操作没问题，可以参考仁度SAT的说明书。
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2021-07-31 09:44:17
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