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jctjct

[交流] PCR不泳道出现亮带怎么回事?

用DNA跑PCR没有特异条带,电泳检测,泳道呈现弥散的亮带是怎么回事啊?

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 15:36 ]
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

上传图片看看.
弥散的话原因可能是:1 模板的用量过大;2 PCR引物的特异性太差.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-16 20:56:59
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xhlxhl

木虫 (正式写手)

我也出现过


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也出现过,尤其是长片段 PCR,泳道一片亮~~ 期待高手 指点
3楼2009-08-17 00:34:06
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illcf_11

银虫 (初入文坛)

弥散的亮带是不是不怎么亮的啊?我以前也遇到过这种情况,当时怀疑是引物和模板的特异性结合不好,同时模板加的量也比较多,产生的大多是某个引物的单向扩增
4楼2009-08-17 20:25:21
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物特异性太差吧 提高退火温度试试 不行的话就重新设计引物
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
5楼2009-08-17 21:22:19
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 8-17 21:29
1.模板多了 模板要少加
2.是你的要减少引物,升高退火
海纳百川止于至善
6楼2009-08-17 21:24:55
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jctjct

恩,不太亮
再问个问题:如果DNA中没有我要的基因,模版加的量大,泳道会出现弥散的亮带吗?
谢谢指教!
7楼2009-08-17 21:36:15
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beisimai895

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可减少模板用量,引物用量及酶的用量,因为这些因素都可以导致出现非特异性扩增.
8楼2009-08-18 08:28:35
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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
提供PCR反应的特异性。提高退火温度,降低模版的量,降低酶量,还可以适当增加一些镁离子的量。
9楼2009-08-18 08:50:27
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1. 提高退火温度
2. 降低模板量
3. 降低Taq酶量
4. 可以加点DMSO
5. 操作中注意避免DNase污染
10楼2009-08-18 09:03:23
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