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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR不泳道出现亮带怎么回事？
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jctjct

[交流] PCR不泳道出现亮带怎么回事？

用DNA跑PCR没有特异条带，电泳检测，泳道呈现弥散的亮带是怎么回事啊？

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 15:36 ]
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1楼 2009-08-16 20:31:25
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
上传图片看看.
弥散的话原因可能是:1 模板的用量过大;2 PCR引物的特异性太差.
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-16 20:56:59
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xhlxhl

木虫 (正式写手)

我也出现过

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也出现过，尤其是长片段 PCR，泳道一片亮~~ 期待高手 指点
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3楼2009-08-17 00:34:06
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illcf_11

银虫 (初入文坛)
弥散的亮带是不是不怎么亮的啊？我以前也遇到过这种情况，当时怀疑是引物和模板的特异性结合不好，同时模板加的量也比较多，产生的大多是某个引物的单向扩增
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4楼2009-08-17 20:25:21
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物特异性太差吧 提高退火温度试试 不行的话就重新设计引物
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
5楼2009-08-17 21:22:19
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 8-17 21:29
1.模板多了 模板要少加
2.是你的要减少引物，升高退火
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海纳百川止于至善
6楼2009-08-17 21:24:55
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jctjct

恩，不太亮
再问个问题：如果DNA中没有我要的基因，模版加的量大，泳道会出现弥散的亮带吗？
谢谢指教！
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7楼2009-08-17 21:36:15
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beisimai895

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可减少模板用量,引物用量及酶的用量,因为这些因素都可以导致出现非特异性扩增.
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8楼2009-08-18 08:28:35
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
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提供PCR反应的特异性。提高退火温度，降低模版的量，降低酶量，还可以适当增加一些镁离子的量。
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9楼2009-08-18 08:50:27
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
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1. 提高退火温度
2. 降低模板量
3. 降低Taq酶量
4. 可以加点DMSO
5. 操作中注意避免DNase污染
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10楼2009-08-18 09:03:23
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