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5mC的dot-blot結果一直出不來，條帶一篇黑，請問怎麼了
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最近在做DNA的5甲基胞嘧啶甲基化檢測，用到dot-blot試了幾次都出不來，不知道怎麼了，請大神指教。實驗步驟。 （1）NC膜用水潤濕。 （2）提取的DNA濃度約為100ng/ul，所以採用每次上樣1.5ul，一共分7次點到NC膜上，等上一個點乾了再原位點下一個。 （3）點完後紫外照射1h. （4）5%的TBST牛奶封閉2小時。 （5）TBST洗膜，5分鐘每次，洗2次。 （6）一抗孵過夜。 （7）TBST洗膜，5分鐘每次，洗2次。 （9）孵二抗1.5h。 （10）TBST洗膜，10分鐘每次，洗3次。 （11）洗完後AI800，加發光液後曝光。 從圖片上看，背景非常地黑，左側似乎能見到2個孔有黑色斑點。但是總體一篇模糊，請問應該做才能做出好看條帶。  图片1.png |
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