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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【交流/求助】求助高手指点Tail-PCR
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ytmito1986

金虫 (小有名气)
★
xiangyuan7816(金币+1,VIP+0): 8-18 20:06
你的情况介绍的不是特别清楚啊，第一轮怎么样，是否全是弥散，第二轮是否有特异性条带，是否是稀释后作为第三轮的模板，等等
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11楼2009-08-18 18:08:10
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xiangyuan7816

引用回帖:
Originally posted by ytmito1986 at 2009-8-18 18:08:
你的情况介绍的不是特别清楚啊，第一轮怎么样，是否全是弥散，第二轮是否有特异性条带，是否是稀释后作为第三轮的模板，等等

一扩一般不用检测吧，只检测二扩和三扩，但我扩了好几次都没有扩出来，一般就是弥散的带和底部的引物二聚体条带，我是一扩稀释40倍然后二扩，二扩稀释10倍三扩
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12楼2009-08-18 20:09:21
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boouy

银虫 (正式写手)
★
xiangyuan7816(金币+1,VIP+0): 8-20 12:05
关于引物：最基本的是引物设计所依据的序列信息必须是可靠的，否则再好的TAIL-PCR体系都会不work。然后就是引物的退火温度在61－65度之间较好。随即引物也需要尝试若干，提高成功率。
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13楼2009-08-20 08:28:37
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zjwang

木虫 (正式写手)
★
xiangyuan7816(金币+1,VIP+0): 8-20 12:05
可以换种高效率的taq酶试试，比如takara的ex taq。第一轮模板的量不能太高，第二轮我们都是稀释100倍，第三轮稀释50倍。
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14楼2009-08-20 09:10:33
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wanzi

木虫 (正式写手)

安静的虫虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
根据你所描述的情况，估计是引物设计上问题，也可能是程序有问题，特别是退火温度。
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15楼2009-12-22 17:17:26
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
可以检测一下你设计的引物的有效性，比如在您认为存在的一段序列上设计引物检测一下。
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jiayoubashaonian
16楼2010-03-10 22:29:57
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