应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【交流/求助】求助高手指点Tail-PCR
162/2返回列表上一页12
查看: 1984  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

ytmito1986

金虫 (小有名气)
★
xiangyuan7816(金币+1,VIP+0): 8-18 20:06
你的情况介绍的不是特别清楚啊，第一轮怎么样，是否全是弥散，第二轮是否有特异性条带，是否是稀释后作为第三轮的模板，等等
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2009-08-18 18:08:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangyuan7816

引用回帖:
Originally posted by ytmito1986 at 2009-8-18 18:08:
你的情况介绍的不是特别清楚啊，第一轮怎么样，是否全是弥散，第二轮是否有特异性条带，是否是稀释后作为第三轮的模板，等等

一扩一般不用检测吧，只检测二扩和三扩，但我扩了好几次都没有扩出来，一般就是弥散的带和底部的引物二聚体条带，我是一扩稀释40倍然后二扩，二扩稀释10倍三扩
赞一下 回复此楼
12楼2009-08-18 20:09:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boouy

银虫 (正式写手)
★
xiangyuan7816(金币+1,VIP+0): 8-20 12:05
关于引物：最基本的是引物设计所依据的序列信息必须是可靠的，否则再好的TAIL-PCR体系都会不work。然后就是引物的退火温度在61－65度之间较好。随即引物也需要尝试若干，提高成功率。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2009-08-20 08:28:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjwang

木虫 (正式写手)
★
xiangyuan7816(金币+1,VIP+0): 8-20 12:05
可以换种高效率的taq酶试试，比如takara的ex taq。第一轮模板的量不能太高，第二轮我们都是稀释100倍，第三轮稀释50倍。
赞一下 回复此楼
14楼2009-08-20 09:10:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanzi

木虫 (正式写手)

安静的虫虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
根据你所描述的情况，估计是引物设计上问题，也可能是程序有问题，特别是退火温度。
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2009-12-22 17:17:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
可以检测一下你设计的引物的有效性，比如在您认为存在的一段序列上设计引物检测一下。
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
16楼2010-03-10 22:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiangyuan7816 的主题更新
162/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-11 04:54 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:32 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 03:59 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 03:56 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:54 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-11 01:24 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:13 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:45 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:12 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境，微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭