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帕戴维

新虫 (小有名气)


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敲除曲霉中的组蛋白酶
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一直做组蛋白酶敲除,这是看家基因比较难敲除。好不容易通过同源重组的方法筛到正确的转化子。现在,发现再转挑纯化就又变成野生型了,但是表观形态和野生型却不一样。各位大佬路过烦请解答一下,谢谢!

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forhighbio

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回复突变,或者说二倍体等位基因,你只替换掉了一个,所以也是有表型的。

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12楼2021-06-30 23:02:30
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帕戴维

新虫 (小有名气)


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引用回帖:
12楼: Originally posted by forhighbio at 2021-06-30 23:02:30
回复突变,或者说二倍体等位基因,你只替换掉了一个,所以也是有表型的。

谢谢,涨知识了。我理解的意思就是,同源重组时替换的是多倍体里的序列,因此传二代时就可能有另一条染色体回复到野生型的序列。但还是有几点不是很明白。求不吝赐教!
1、查阅了回复突变定义,是基因型和表现型都变化成原始菌株,但我这个只有基因型回复到野生型的序列。
2、如果是二倍体只替换了其中一条,那么一代突变体克隆验证时就应该出现两个条带(分别是依旧存在的野生型序列和替换的抗性基因序列)。
3、我是用农杆菌侵染的方法,共培养时用的孢子是从平板上刮下来的,会有菌丝体。因此,后续再排除该情况,我考虑过滤掉菌丝体,用单倍体的孢子共培。你建议如何?
4、另外,回复突变还与敲除的基因有关吗?因为我敲的是组蛋白基因,而这属于看家基因。
5、楼主对此有何建议,可否分享解决方法。
在此感激不尽!

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13楼2021-07-01 23:40:38
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2021-06-30 16:28   回复  
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2021-06-30 16:29   回复  
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qian0004楼
2021-06-30 16:31   回复  
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tzynew5楼
2021-06-30 16:34   回复  
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YU_DG10楼
2021-06-30 16:57   回复  
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Jzhang21311楼
2021-06-30 17:13   回复  
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