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帕戴维

新虫 (小有名气)
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敲除曲霉中的组蛋白酶
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一直做组蛋白酶敲除，这是看家基因比较难敲除。好不容易通过同源重组的方法筛到正确的转化子。现在，发现再转挑纯化就又变成野生型了，但是表观形态和野生型却不一样。各位大佬路过烦请解答一下，谢谢！

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1楼2021-06-30 16:22:47
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forhighbio

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回复突变，或者说二倍体等位基因，你只替换掉了一个，所以也是有表型的。

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帕戴维
12楼2021-06-30 23:02:30
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帕戴维

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引用回帖:
12楼: Originally posted by forhighbio at 2021-06-30 23:02:30
回复突变，或者说二倍体等位基因，你只替换掉了一个，所以也是有表型的。

谢谢，涨知识了。我理解的意思就是，同源重组时替换的是多倍体里的序列，因此传二代时就可能有另一条染色体回复到野生型的序列。但还是有几点不是很明白。求不吝赐教！
1、查阅了回复突变定义，是基因型和表现型都变化成原始菌株，但我这个只有基因型回复到野生型的序列。
2、如果是二倍体只替换了其中一条，那么一代突变体克隆验证时就应该出现两个条带（分别是依旧存在的野生型序列和替换的抗性基因序列）。
3、我是用农杆菌侵染的方法，共培养时用的孢子是从平板上刮下来的，会有菌丝体。因此，后续再排除该情况，我考虑过滤掉菌丝体，用单倍体的孢子共培。你建议如何?
4、另外，回复突变还与敲除的基因有关吗？因为我敲的是组蛋白基因，而这属于看家基因。
5、楼主对此有何建议，可否分享解决方法。
在此感激不尽！

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13楼2021-07-01 23:40:38
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202103青争2楼
2021-06-30 16:28   回复  
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yugege20093楼
2021-06-30 16:29   回复  
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qian0004楼
2021-06-30 16:31   回复  
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tzynew5楼
2021-06-30 16:34   回复  
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xspring08086楼
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秋土豆香7楼
2021-06-30 16:35   回复  
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gao199207078楼
2021-06-30 16:51   回复  
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梦想?丰满9楼
2021-06-30 16:55   回复  
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YU_DG10楼
2021-06-30 16:57   回复  
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Jzhang21311楼
2021-06-30 17:13   回复  
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