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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 问题求助
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ypjiang6889

新虫 (正式写手)

[交流] western blot 问题求助

western blot 显色的时候什么条带都没有，只有蛋白marker,请问这是什么原因。还有杂交的时候杂出全蛋白，这又是什么原因，请高手指教，谢谢。
我一抗二抗都孵育了一个半小时，封闭的时候是4度过夜的。
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1楼 2009-08-12 15:00:43
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
内参有没有做出来？
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2楼2009-08-12 15:31:25
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wangyh2028

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
sutao1979(金币+1,VIP+0): 8-12 19:42
杂出了全蛋白应该是因为非特异性结合了。二抗浓度太高，二抗之后漂洗不够，封闭时间应该是足够了。每一步之后的漂洗是否彻底呢？
我当时做的时候亮蓝显色也显不出来，可能跟膜有关，但是只要能杂出来就行
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3楼2009-08-12 19:13:19
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wangyh2028

铁虫 (小有名气)
还有可能就是抗体特异性不够，但是我们一般不怀疑抗体质量等这些客观因素，更多的应该从实验者操作来找主观问题。
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4楼2009-08-12 19:16:47
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