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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 请问重叠延伸PCR怎么构建缺失突变质粒呀，具体怎么做
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Eari

新虫 (初入文坛)

[交流] 请问重叠延伸PCR怎么构建缺失突变质粒呀，具体怎么做 已有1人参与

求问用重叠延伸PCR怎么构缺失突变质粒，打算构缺失42bp的突变质粒，现在已经设计了突变引物，但具体操作不知道该怎么做，新手小白求帮助

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1楼 2021-05-22 21:03:43
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
跟做定点突变一样的方法
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-05-23 09:15:31
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Eari

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-05-23 09:15:31
跟做定点突变一样的方法

您好，我没做过定点突变，可以说详细一点吗？需要试剂盒吗？

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3楼2021-05-23 10:31:59
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by Eari at 2021-05-23 10:31:59
您好，我没做过定点突变，可以说详细一点吗？需要试剂盒吗？
...

参考这个试剂盒的说明书：https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/public/200523.pdf
但是不用买他的试剂盒，用自己有的高保真pcr酶就行。
如果做不出来可以考虑在要删除的区域用任意限制性内切酶先切一下（如果有特异性位点的话），会大大提高效率。
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Eari
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2021-05-23 12:25:47
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Eari

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-05-23 12:25:47
参考这个试剂盒的说明书：https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/public/200523.pdf
但是不用买他的试剂盒，用自己有的高保真pcr酶就行。
如果做不出来可以考虑在要删除的区域用任意限制性内切酶先切一 ...

好的，非常感谢

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5楼2021-05-23 20:04:33
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