24小时热门版块排行榜    

查看: 911  |  回复: 1
【悬赏金币】回答本帖问题,作者weizhi111将赠送您 20 个金币

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 核蛋白免疫荧光注意事项 已有1人参与

核蛋白免疫荧光有什么要注意的吗?做了几次都没有明显的核定位,抗体WB效果很好,有哪些经验可以改进吗?
步骤:1. 4 %PFA固定1-2h(由于是整胚免疫荧光,所以不切片);
2. 1% triton X100处理30min;
3. 5% 山羊血清封闭1h;
4. 一抗稀释于2%山羊血清,4 度过夜 (1:50)
5. PBST洗,10min X 3次
6. 荧光二抗(1:1000)室温1h
7.封片
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

考虑设置一下对照。其他条件都一样,但是一抗稀释液里不加抗体,然后照常二抗孵育。
在同样的荧光显微镜设置下,对照没有颜色,正常染色组由颜色确定看到的是抗体染上了,而不是非特异性的吸附。
另外,抗体能做WB不代表能做免疫荧光。
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-05-22 14:54:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weizhi111 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
信息提示
请填处理意见