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GC-MS做游离脂肪酸的绝对定量问题请教
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各位老师，我最近做的是用GC-MS对大鼠体内游离脂肪酸进行一个绝对定量，在用空白血来建标曲的时候，我不清楚混标液和内标液啥时候加进去，麻烦各位老师帮我看看以下三种方法哪种可行或者说老师能给出更好的方法： 第一种：取100ul空白血清，加入2mL（血清体积的20倍）的氯仿甲醇溶液,超声30min,取上清液,加入25%的硫酸-甲醇溶液2mL,放在80℃水浴上,甲酯化90min,再加1mL的正己烷萃取,加1.5mL的0.9%NaCl,混匀，吸取上清液600uL,加入15ul混标和15μL内标,混匀加入进样瓶,进入GC-MS检测 第二种，取空白血100ul，加入5ul混标溶液，混匀，加入氯仿甲醇，超声30min, 取上清液，加入25%的硫酸-甲醇溶液2mL,放在80℃水浴上,甲酯化90min,再加1mL的正己烷萃取,加1.5mL的0.9%NaCl,混匀，取上清液100ul, 氮气吹干，100ul正己烷复溶，并加入5ul内标 第三种：取空白血100ul, 加入5ul 混标，混匀，加入2ml 25%的硫酸-甲醇溶液，放在80℃水浴上,甲酯化90min,取出，冷却至室温，加1mL的正己烷和1.5mL的0.9%NaCl,混匀，4000r/min 离心 5min， 取上清液500ul, 氮气吹干，100ul正己烷复溶，并加入5ul内标，混匀，进样 此外，我们做绝对定量的时候，方法学验证是否跟LC-MS做药动一样，也要做专属性和精密度和准确度这些呢？是否有相关指导标准呢？ |
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