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大肠杆菌表达，融合蛋白用肠激酶切不开
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本人使用pet32a表达载体，表达了一个融合蛋白，基因测序正确，没做western，因为通过western不能确定就是目的蛋白。 经过镍柱和sephadex g25 纯化获得了融合蛋白，过g25脱盐的时候加了30毫升填料，8ml样品。蛋白电泳显示纯化成功，基本无杂带。 用肠激酶切割，生工的和neb的酶都切过，都切不开。切割体系为：44ul蛋白 1ul酶 5ulbuffer，样品浓度为0.24ug/ul。样品浓度为0.5 ug/ul ，酶量增加到10ul时还是切不开。用dnastar模拟过，肠激酶识别序列在蛋白表面。 这可能是什么原因呢？望大家帮忙指点，不胜感激。 |
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