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做快速核酸检测需要知道的那些技术（一）
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等温扩增技术是近年来发展起来的基于恒温扩增的新型核酸扩增技术，其中就包括重组酶和聚合酶等温检测技术，基于多年的实验经验，今天就来谈谈其原理、特点、应用以及相关信息： 1、重组酶和聚合酶等温检测是什么？ 重组酶和聚合酶等温检测是一种等温核酸扩增技术，可在等温条件下(一般为37℃-40℃)，5-20min内，即可实现对目的核酸片段的扩增，是采用重组酶代替PCR的高温变性，完成对双链的解链，解开的双链被单链结合蛋白结合，防止DNA链复性，再由聚合酶完成链的延伸，实现扩增。 模拟T4噬菌体在体内的核酸扩增。 2、重组酶和聚合酶等温检测基本原理是什么？ 重组酶和聚合酶等温检测主要使用了三种酶：重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶，整个扩增过程大体可分为三个过程：一，重组酶和引物形成重组酶/引物复合体，在DNA双链上找到和引物配对区域，然后入侵，解开双链为单链DNA，并且引物配对；二，解开的单链DNA与单链结合蛋白结合，防止单链DNA再度复性为双链DNA；三，在DNA聚合酶的作用下，催化链的延伸，生成新的DNA链。经过几十个循环后，DNA新链的数量指数增长。 3、重组酶和聚合酶等温检测技术特点是什么？ (1) 等温扩增，使现场检测成为可能 重组酶和聚合酶等温检测的反应温度为37℃，摆脱仪器的束缚，使得仪器简单化和小型化，可实现现场检测。 (2) 快速扩增，极大缩短反应时间 5-20min内即可实现对目的核酸片段的扩增，非常符合快速检测的需求。 (3) 灵敏度高，特异性强 具有同PCR同等的灵敏度，重组酶和聚合酶等温检测要求引物长度不低于30bp，进一步使扩增的特异性增强。 (4) 引物探针设计简单 引物和探针设计原则同PCR的设计原则相似，略微不同的是重组酶和聚合酶等温检测的引物长度要不低于30bp，探针长度不低于45bp。 (5) 实时监测 通过荧光探针的加入，可在整个反应过程中对结果进行实时监测，方便结果的判读。 (6) 操作简单 重组酶和聚合酶等温检测的操作过程非常简单，只需要将相关溶液简单加入到试剂中即可，而且整个加入过程都可以在室温下进行，这就使得使用人员经过简单培训，就可以进行操作更适合广泛推广。 4、重组酶和聚合酶等温检测的应用 可用于病原体的检测和突变基因的检测，包括不限制于体外诊断，动植物疫病检测、宠物病原体检测、肠道微生物检测、食源性微生物检测等。 5、重组酶和聚合酶等温检测是否可对RNA进行扩增？ 可以，在重组酶和聚合酶等温检测反应体系中加入逆转录酶，即可实现对RNA的一步法扩增。 |
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