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fyn512045

新虫 (初入文坛)

[交流] 请教,克隆检测未出现目的条带,非特异条带很亮,拖带是什么原因?

请教各位,我做克隆后,电泳检测三个样,都未出现目的条带,非特异条带很亮,是什么原因?还有就是有拖带,又是怎么回事?

[ Last edited by amisking on 2009-8-11 at 12:39 ]
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

检测的菌也太少了吧.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-10 15:53:05
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bingdong05

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
非特异性条待的话可能与你的退火温度有关
3楼2009-08-11 11:02:48
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tancf

金虫 (小有名气)

看看你的引物设计的是否合适。
4楼2009-08-11 12:34:00
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tancf

金虫 (小有名气)

可以再多挑几个菌做PCR鉴定,总是没有的话,就说明克隆失败了。
5楼2009-08-11 12:35:51
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zhangf323

新虫 (初入文坛)

非特异条带多的原因有:镁离子浓度偏高,退火温度偏低,酶的浓度偏高,循环次数太多等。电泳只检测3个样,太少了吧?!
6楼2009-08-11 13:39:26
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fyn512045

新虫 (初入文坛)

我做的三个样,是三个引物,每一个做了七个重复,都是那样的没有目的条带,非目的条带很亮,有一个还拖带了,不知道是怎么回事?
7楼2009-08-11 15:00:07
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我一般都是酶切检测,PCR结果不可靠
8楼2009-08-12 00:18:59
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天

海到尽头天做岸,山登绝顶我为峰。
9楼2009-08-12 00:42:19
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