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小四2228

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】怎么在水体中分离藻类

最近发现要做藻类实验的时候，自己要培养的藻类往往长的很慢，请问各位有什么方法来从含藻类丰富的水体中来分离不同种类的藻，谢谢~~

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新手上路~！不是马路杀手哦~！

1楼 2009-08-06 16:56:44

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古木

木虫 (正式写手)

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★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
kongsun(金币+3,VIP+0):^_^，谢谢解答，藻类专家，很详细嘎！ 8-15 23:30

介绍几种分离的技术：
1．毛细管清洗技术
选择直径为3～4mm的软玻璃管，或者其它任何适合拉成毛细管的巴氏滴管，用镊子夹住滴管的前端，放在酒精喷灯的外焰上，直到玻璃变软，迅速移离火焰，同时快速拉成毛细管。由于拉的时候的力度和掌握时机的不同，毛细管的口径会有不同，所以经常练习，达到熟练，可以将毛细管拉成自己需要的口径，即刚刚适合要挑取的藻细胞进入的大小。然后用镊子把毛细管头端夹断，注意夹断的时候的用力均匀，尽量要保证毛细管口平滑，避免成为锯齿状边缘。在管的另一段加上胶吸头或者软的橡皮管。
用滴管吸取少量采集样品滴在灭菌后的点滴板上的凹陷上，置于解剖镜下观察。如果样品中藻细胞浓度很大，种类繁多，可以将样品用蒸馏水或者培养基稀释。然后在至少6～12个凹陷上滴入蒸馏水和培养基。在解剖镜下观察，移动毛细管的细管头在需要挑取的细胞上，小心进入液体中，迅速挑取，将细胞排放在另一个装有蒸馏水或者培养基的凹陷里。用以上方法挑取12～15个单细胞，然后在装有蒸馏水或者培养基的凹陷中清洗6～12次，每清洗一次，必须重新拉一次毛细管。
经过有效的清洗，将最后得到的单细胞放在8个装满培养基的灭菌过的小试管中，放在适合被挑取藻生长的光照条件和温度条件下，开始培养，3～6周后即可以镜检看是否生长了。
用毛细管分离的方法分离丝状藻类，按照以上所述的方法拉一根毛细管，前端带上一小钩，小心勾住藻样中的一根单丝体，分离出来，在点滴板的凹陷清洗6～12 次。清洗结束后，取一含0.5％～0.75％低浓度的agar平板，将清洗后的藻丝体在平板上拖动几次，除去丝体表面的一些体表寄生菌。

2．喷雾技术
1964年，Wiedemanl.建立了一种相对简单的技术，既可以分离，也可以用来纯化。首先灭菌一批15ml的离心管，取8～9ml藻样放入离心管，调节转速2000rpm，离心45～90秒，去除上清液，然后加入蒸馏水或者灭菌后的培养基，重复以上操作12次左右。经过最后清洗，倒去2ml上清液。取15cm长的小滴管拉成毛细管（毛细部分长度需略长于离心管），将该毛细管夹断，使毛细部分略长于离心管，插入到离心管底部，离心管口用棉花塞住，毛细管留出一部分在棉花之上。将离心管直立固定在铁架台，将压缩空气通过一灭菌过的滴管放出，喷在毛细管头部，这把从离心管底部通过毛细管出来的藻细胞均匀吹出，在距离离心管25cm处放置一个灭菌过的agar培养皿，这样经压缩空气喷出的藻细胞就到达平板上。喷雾结束后，将agar用parafilm膜密封好，置于适当培养条件下培养，几天后，单细胞的藻，或者单藻落长出来，可以在无菌的条件下用毛细管挑出来，放入灭菌后的液体培养基培养。
3．其它技术
这里介绍几种其它的分离技术。
倒平板法：
制作营养成分相对较少的固体培养基，灭菌后冷却，当培养基已经变凉但还未凝固的时候，取少量采集样品，与之混合，搅拌，倒在灭菌后的培养皿上，等它凝固，密封培养。培养一周左右，将生长出来的单克隆从原培养基上割下来，放入新鲜的培养基继续培养。
划平板法：
当藻单元的直径小于10µm时，最容易的分离方法就是划平板或涂平板法。这两者中的任何一种分离方法，都可能得到无菌的培养物。准备一个装有用琼脂（1-1.5%）固化的培养基的培养皿，滴1-2滴自然采集物于琼脂的边缘。用火焰灭菌一个线环，或者一弯玻璃棒（将棒浸入70%酒精溶液，放在火焰上点燃并移离火焰；重复几次。）使用无菌的线环或玻棒，在无菌条件下将滴在琼脂上的自然采集物滴平行划在琼脂表面上。如有需要，可用蜡笔（记号笔）在培养皿的外底部划线标记，在合适条件下培养4-8天，然后在显微镜的高倍镜下观察，检查该样品是否为单藻株。将挑得的单克隆利用上述方法再划平板，让其再长出新的藻落。第二次划平板可以减少细菌污染藻落的可能性，也使各藻落更趋于来自同一藻单元。最后，从目的藻落挑取藻单元到液体或琼脂培养基。
涂平板法：
该方法与划平板法相似，只是它是将藻单元涂抹在琼脂培养基的表面，而不是用线环划线。
准备一个培养皿，用巴斯德吸管吸一滴自然采集物，将其固定在桌子上，细端离开桌面向上倾斜。在其粗端套上气泵，使在其细端产生较高压力的空气流。一手持有琼脂培养基的培养皿，使培养的琼脂表面与产生气流的细管垂直，距离约200mm。一手持吸有自然采集物的巴斯德吸管，对准高速空气流挤出采集物液滴，使在高速空气流下产生的水雾均匀喷洒在琼脂培养基表面，密封培养。培养一周左右，在显微镜的高倍镜下观察，检查该样品是否为单藻株，将挑得的单克隆转移到液体或琼脂培养基。