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关于FISH的一些疑问
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我方向是环境工程偏微生物(厌氧氨氧化)，需要观察反应器内活的厌氧氨氧化细菌随时间数量的变化。看文献的描述，测定的方法是测MLVSS结合live/dead实验以及FISH实验，我的问题是: 1）FISH实验中，能够与探针原位杂交的细菌只是活的嘛，还是死的活的都能与探针杂交?原理是为什么 2）FISH实验中为何需要用多聚甲醛等物质对细菌进行固定这一步骤？固定是指固定细菌的移动还是形状还是其它？不固定后果是什么？ 望大神解答感激不尽！ 发自小木虫Android客户端 |
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先回答（2），FISH的固定步骤主要是为了稳定大分子和细胞骨架结构，避免杂交的过程中细胞裂解。参考如下https://www.arb-silva.de/fish-pr ... =General%20overview,of%20the%20cells%20during%20hybridization. 这个过程基本上对细胞会造成很大影响，固定完细胞也差不多死了。 对于你提到的（1），我不清楚你指的是想只针对采样中的活细胞进行检测呢？还是说需要在检测中操持细胞活性？ 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
迪妮莎的泪2楼2021-03-16 00:45:29
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非常感谢您的回答，对于1）我的意思是FISH中用到的探针，比如专门与大肠杆菌染色体杂交的探针，能够与初始状态的样品中死的大肠杆菌杂交吗，还是只能够与初始状态的样品中活的大肠杆菌杂交。我问这个问题是因为，我需要测定一个成分不单一(有多种细菌包含在内)的污泥中的其中一种细菌的活细菌数量随时间变化，而在看到的文献中为了测量这一种细菌的活菌数量，是用总的MLVSS(表示所有种类，活的死的细菌总的数量)，乘以LIVE/DEAD值(表示所有细菌中活细菌的比例，但不区分细菌种类)，再乘以FISH值(即用两种探针，一种是能够与所有细菌种类杂交的探针，另一种是只能够与目的种类的细菌杂交的特异性探针，即能够得到该目的细菌占所有细菌数量的比例)，我不懂的就是，按照这种方法如果是正确的，那么FISH过程中是不是只有样品中原本活着的细菌才能够与探针杂交，样品中已经死的细菌，是不是细菌的染色体成分在死后很快就分解了(我不太了解细菌死亡后的生理过程)，因此通过FISH杂交也检测不出来 发自小木虫Android客户端 |
3楼2021-03-17 16:28:49
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