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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何对载体进行双酶切获得目的片段
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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 如何对载体进行双酶切获得目的片段

我现在将目的片段克隆到了克隆载体上，现在想通过克隆载体上的MCS中的两种酶的单切点将目的片段切下来。不知道怎么建立两种酶的酶切体系。请指教
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1楼 2009-08-04 10:10:59
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银杏下

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果你不是用NEB的酶，就不能用NEB的手册来判断，因为不同公司相同酶的buffer会有区别，例如NcoI和NotI用NEB的酶可以同时酶切，但是fermentas的就不可以，所以要根据你用的酶的手册来确定。
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5楼2009-08-06 20:39:00
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
分步酶切或双酶切都行，具体的反应体系产品说明书都有，只是要注意双酶切的buffer
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2楼2009-08-04 10:18:22
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hqhe

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先看你选择的那两种酶切位点，然后根据不同公司的酶选择buffer和酶切体系

我们用NEB的酶较多，NEB的手册上有图表告诉你任意两种酶在一起使用的时候该用什么buffer，有的两种酶不适合在一起用的要先后单酶切，不过这种情况较少
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3楼2009-08-04 10:20:22
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greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hqhe at 2009/8/4 10:20:
首先看你选择的那两种酶切位点，然后根据不同公司的酶选择buffer和酶切体系

我们用NEB的酶较多，NEB的手册上有图表告诉你任意两种酶在一起使用的时候该用什么buffer，有的两种酶不适合在一起用的要先后单酶切， ...

谢谢！如果不用NEB的酶能不能获得这种手册呢？如何获取？
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4楼2009-08-04 10:51:37
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