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新虫 (小有名气)

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[交流] 如何培养细胞？——新手入门已有1人参与

简介：一枚生命科学行业的技术控，共同学习，欢迎补充。

什么是细胞培养？

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。

不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。

细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

接下来介绍一些常见问题解决方法。

1.冷冻管应如何解冻？

取出冷冻管后，须立即放入37 °C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。

2. 可否使用与原先培养条件不同的培养基？

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞可能无法立即适应，导致细胞状态不好甚至死亡。
3. 可否使用与原先培养条件不同的血清？

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

4. 培养细胞时应使用多少浓度的CO2？5%还是10%，或根本没有影响？

一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5% CO2 培养细胞。

5. 何时须更换培养基？

视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

6. 培养基中是否须添加抗生素？

除特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素，但实际操作中有时会加入1%的青链霉素来避免细菌污染。

7. 悬浮细胞应如何继代处理？

一般仅需在原培养瓶中持续加入新鲜培养基，稀释细胞浓度即可，若培养液太多，可将培养瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。

8. 一般动物细胞的离心速率应为多少转速？

欲回收动物细胞，其离心速率一般为300 g (约1,000 rpm)，5-10分钟，过高转速将造成细胞死亡。

9. 合适的细胞接种密度是多少？

依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦可能会导致细胞生长过慢。

【互动回帖吧】

关于细胞培养过程中会遇到各种各样的问题，比如胞质疏松，细胞状态不好，养不起来等等，你们会如何解决这些问题呢？回帖分享下吧~

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