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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒测序总是有缺失 已有1人参与

各位虫友好,小弟去年构建了个载体3900bp的,测序发现有个缺失,后来,又重新构建了一次,测序发现在另外一个点又出现了碱基缺失,之前的缺失又没有了。我用的是高保真酶,按理说不会有这么高的突变率,各位能够帮我分析一下吗?

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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、把突变位点区域重测一次,可能是测序不准。
2、如果有突变,就设计引物突变回来吧。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
2楼2021-03-06 21:53:33
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five56

新虫 (小有名气)

楼主解决了吗,我也遇到了类似的问题

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3楼2023-06-01 19:37:31
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wenting8918

木虫 (正式写手)

小硕

可能序列在菌中不稳定,尝试特殊细胞, 低温。

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永远幸福,幸福永远
4楼2023-06-05 07:30:17
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打工人小欢

铁虫 (初入文坛)

3900算是长一些的克隆了,按照高保真的酶万分之一的错配率,有一个缺失也是正常现象,建议多扎几个克隆去测序。

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5楼2023-06-08 14:47:08
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