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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒测序总是有缺失
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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒测序总是有缺失 已有1人参与

各位虫友好，小弟去年构建了个载体3900bp的，测序发现有个缺失，后来，又重新构建了一次，测序发现在另外一个点又出现了碱基缺失，之前的缺失又没有了。我用的是高保真酶，按理说不会有这么高的突变率，各位能够帮我分析一下吗？

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1楼 2021-03-06 12:41:56
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、把突变位点区域重测一次，可能是测序不准。
2、如果有突变，就设计引物突变回来吧。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
2楼2021-03-06 21:53:33
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five56

新虫 (小有名气)
楼主解决了吗，我也遇到了类似的问题

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3楼2023-06-01 19:37:31
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wenting8918

木虫 (正式写手)

小硕
可能序列在菌中不稳定，尝试特殊细胞， 低温。

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永远幸福，幸福永远
4楼2023-06-05 07:30:17
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打工人小欢

铁虫 (初入文坛)
3900算是长一些的克隆了，按照高保真的酶万分之一的错配率，有一个缺失也是正常现象，建议多扎几个克隆去测序。

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5楼2023-06-08 14:47:08
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