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重组质粒测序总是有缺失
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铁虫
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虫号: 9773434
注册: 2018-08-06
专业: 食品科学
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重组质粒测序总是有缺失
已有1人参与
各位虫友好,小弟去年构建了个载体3900bp的,测序发现有个缺失,后来,又重新构建了一次,测序发现在另外一个点又出现了碱基缺失,之前的缺失又没有了。我用的是高保真酶,按理说不会有这么高的突变率,各位能够帮我分析一下吗?
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2021-03-06 12:41:56
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木虫
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注册: 2008-04-19
性别:
MM
专业: 全球变化生态学
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
1、把突变位点区域重测一次,可能是测序不准。
2、如果有突变,就设计引物突变回来吧。
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VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
2楼
2021-03-06 21:53:33
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新虫
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虫号: 33768657
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专业: 病原真菌学
楼主解决了吗,我也遇到了类似的问题
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3楼
2023-06-01 19:37:31
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木虫
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在线: 336.3小时
虫号: 764447
注册: 2009-05-06
专业: 生物化学
可能序列在菌中不稳定,尝试特殊细胞, 低温。
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永远幸福,幸福永远
4楼
2023-06-05 07:30:17
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铁虫
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虫号: 33866927
注册: 2023-06-06
专业: 生物物理、生物化学与分子
3900算是长一些的克隆了,按照高保真的酶万分之一的错配率,有一个缺失也是正常现象,建议多扎几个克隆去测序。
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5楼
2023-06-08 14:47:08
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