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两步PCR和巢氏PCR
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| 请问各位大侠,两步PCR和巢氏PCR是同一个概念吗?如果不是有什么区别吗?谢谢大家指点! |
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不尽然! 两步PCR是个笼统地概念,巢式PCR也是两步啊。 狭义的应该叫“融合PCR”。 先讲两者不同点: 巢式PCR:以第一次PCR为模板扩增此模板中的片断,产物大小比第一次PCR产物要小。 融合PCR:最简单的模型----第一步有两个PCR,第二步以这两个PCR产物为模板(体系中同时加入等量的PCR产物),第二步的产物大小是第一步两个PCR产物大小之和。 此技术的作用:1、去掉目的片断的酶切位点;2、融合两个或多个基因。 在设计引物时需要注意问题:第一步中的两个PCR引物,第一个PCR下游引物与第二个PCR上游引物要有绝大多数的重叠区(这两个引物的长度通常比较长,目前我看到的文献中最长的将近50bp);第二步PCR的引物需要第一个PCR的上游引物和第二个PCR的下游引物;模板为第一步两个PCR产物(等量)。 当然在设计引物的时候需要考虑这四个引物的GC含量要相当,退火温度要相当。 |
5楼2009-07-31 00:07:08
hyde0706
木虫 (正式写手)
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2楼2009-07-30 20:22:52
zplipeng
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3楼2009-07-30 21:05:04
greatsaint
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4楼2009-07-30 22:18:22










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