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shensc727

金虫 (小有名气)

[交流] 两步PCR和巢氏PCR

请问各位大侠,两步PCR和巢氏PCR是同一个概念吗?如果不是有什么区别吗?谢谢大家指点!
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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不尽然!
两步PCR是个笼统地概念,巢式PCR也是两步啊。
狭义的应该叫“融合PCR”。

先讲两者不同点:
    巢式PCR:以第一次PCR为模板扩增此模板中的片断,产物大小比第一次PCR产物要小。
    融合PCR:最简单的模型----第一步有两个PCR,第二步以这两个PCR产物为模板(体系中同时加入等量的PCR产物),第二步的产物大小是第一步两个PCR产物大小之和。
此技术的作用:1、去掉目的片断的酶切位点;2、融合两个或多个基因。
在设计引物时需要注意问题:第一步中的两个PCR引物,第一个PCR下游引物与第二个PCR上游引物要有绝大多数的重叠区(这两个引物的长度通常比较长,目前我看到的文献中最长的将近50bp);第二步PCR的引物需要第一个PCR的上游引物和第二个PCR的下游引物;模板为第一步两个PCR产物(等量)。
当然在设计引物的时候需要考虑这四个引物的GC含量要相当,退火温度要相当。
5楼2009-07-31 00:07:08
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hyde0706

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-30 21:09
应该不是一个概念。巢式PCR是由一对外引物和一对内引物组成的,用于提高PCR的灵敏度和特异性。两步PCR我的理解是先进行PCR,然后稀释产物,再用相同引物去扩增第一次的产物,主要是提高灵敏度。抛砖引玉~
2楼2009-07-30 20:22:52
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zplipeng

金虫 (著名写手)

同意LS 的说法。。。
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
3楼2009-07-30 21:05:04
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greatsaint

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同意一楼的说法,应该就是 这个意思。
4楼2009-07-30 22:18:22
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