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加油小小帅

新虫 (初入文坛)


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重叠延伸PCR目的条带纯化后扩增依然是非特异条带
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最近做重叠延伸PCR连片段,一直有非特异扩增,单独将目的基因切下再做pcr还是非特异扩增,我是三个片段连接,这个非特异好像是两端的连上了中间的片段的非特异小片段,做过很多次稀释,也做过巢式PCR,还有不断的纯化,都只是p出那条非特异,各位大神有什么建议?纯化过的片段在加引物很难P,是不是都是这样啊?图一是有目的片段的,图二是纯化后只有非特异的片段。

重叠延伸PCR目的条带纯化后扩增依然是非特异条带


重叠延伸PCR目的条带纯化后扩增依然是非特异条带-1


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KM石头

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建议楼主先将两个片段通过重叠延伸PCR连接到一起,连接成功后再连接第三个
12楼2021-02-19 14:36:24
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BRNTQJTW2楼
2021-02-02 11:41   回复  
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tzynew3楼
2021-02-02 11:44   回复  
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wyj9705楼
2021-02-02 12:13   回复  
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saracaHC7楼
2021-02-02 12:42   回复  
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Jzhang2138楼
2021-02-02 12:52   回复  
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Hot_kid9楼
2021-02-02 13:04   回复  
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5679323410楼
2021-02-02 13:05   回复  
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xn800811楼
2021-02-02 13:07   回复  
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