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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重叠延伸PCR目的条带纯化后扩增依然是非特异条带
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加油小小帅

新虫 (初入文坛)
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重叠延伸PCR目的条带纯化后扩增依然是非特异条带
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最近做重叠延伸PCR连片段，一直有非特异扩增，单独将目的基因切下再做pcr还是非特异扩增，我是三个片段连接，这个非特异好像是两端的连上了中间的片段的非特异小片段，做过很多次稀释，也做过巢式PCR，还有不断的纯化，都只是p出那条非特异，各位大神有什么建议？纯化过的片段在加引物很难P，是不是都是这样啊？图一是有目的片段的，图二是纯化后只有非特异的片段。

重叠延伸PCR目的条带纯化后扩增依然是非特异条带


重叠延伸PCR目的条带纯化后扩增依然是非特异条带-1


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1楼 2021-02-02 11:41:51
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KM石头

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议楼主先将两个片段通过重叠延伸PCR连接到一起，连接成功后再连接第三个
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12楼2021-02-19 14:36:24
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BRNTQJTW2楼
2021-02-02 11:41   回复  
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tzynew3楼
2021-02-02 11:44   回复  
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落单候鸟14714楼
2021-02-02 11:44   回复  
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wyj9705楼
2021-02-02 12:13   回复  
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秋土豆香6楼
2021-02-02 12:28   回复  
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saracaHC7楼
2021-02-02 12:42   回复  
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Jzhang2138楼
2021-02-02 12:52   回复  
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Hot_kid9楼
2021-02-02 13:04   回复  
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5679323410楼
2021-02-02 13:05   回复  
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xn800811楼
2021-02-02 13:07   回复  
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