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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助！为何提取DNA梯度稀释后Ct值无差别
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coralpt

新虫 (小有名气)

[求助] 求助！为何提取DNA梯度稀释后Ct值无差别 已有1人参与

各位小伙伴，本人提取放线菌DNA10倍梯度稀释准备做标准曲线，稀释5个梯度跑PCR发现各梯度间Ct值无明显变化，甚至出现稀释后Ct值比未稀释模板还小的情况。另外Ct数值非常小，大概是10左右，有的还达到6,7这样的数值。融解曲线是单峰，体系是20ul里加入2ul模板，正反引物各0.8ul，6.4ul dd水及10ul SYBR green。未稀释的DNA浓度为20ng/ul。稀释过程是10ul加入90ul TE缓冲液。请大家帮忙分析可能原因，不胜感激！
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1楼 2021-01-29 20:56:19
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大肠杆

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

熔解峰温度是多少，一般低于70℃属于非特异性扩增；另外，有没有做阴性对照，是否有扩增，如果有的话就是存在污染
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2楼2021-03-08 16:57:03
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