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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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coralpt

新虫 (小有名气)

[求助] 求助!为何提取DNA梯度稀释后Ct值无差别已有1人参与

各位小伙伴,本人提取放线菌DNA10倍梯度稀释准备做标准曲线,稀释5个梯度跑PCR发现各梯度间Ct值无明显变化,甚至出现稀释后Ct值比未稀释模板还小的情况。另外Ct数值非常小,大概是10左右,有的还达到6,7这样的数值。融解曲线是单峰,体系是20ul里加入2ul模板,正反引物各0.8ul,6.4ul dd水及10ul SYBR green。未稀释的DNA浓度为20ng/ul。稀释过程是10ul加入90ul TE缓冲液。请大家帮忙分析可能原因,不胜感激!
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大肠杆

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

熔解峰温度是多少,一般低于70℃属于非特异性扩增;另外,有没有做阴性对照,是否有扩增,如果有的话就是存在污染
2楼2021-03-08 16:57:03
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