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belinda227

木虫 (小有名气)

[交流] pfu扩增重复性差是什么原因

用金思特的angel pfu扩增出了一个酶基因,现在要连表达载体,但是两头加酶切位点扩增的结果与之前不加酶切位点的扩增结果出现了9个碱基的错配,氨基酸出现了1个错配。请问各位高手,我这样的情况是什么原因呢?谢谢!

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-4 at 15:23 ]
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xinlai

银虫 (小有名气)

金思特的pfu?
换个厂家吧。
2楼2009-07-29 09:34:04
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)

换个牌子吧 这不是害人么
3楼2009-07-29 10:48:18
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hyde0706

木虫 (正式写手)

金思特差点吧?至少也要用Takara的酶吧?如果不能换,建议你适当提高一些退火温度,还有就是增加镁离子的量,多少能提高一点特异性。
4楼2009-07-29 17:14:49
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baiyidao

金虫 (小有名气)

我用的宝生物Taq和PerimSTAR都不错
5楼2009-07-29 21:24:57
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