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大鼠肝切片裂片问题已有4人参与
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最近在做HE，肝切片的时候总是发生裂片现象，请问哪位好心人有关于大鼠的脱水及染色流程，忙着赶实验，多谢了 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2023-03-06 17:33:55
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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我很乐意为您解答关于大鼠肝脱水和染色的流程。以下是一般常用的HE染色流程： 脱水： 1. 将切好的组织片放置在洗涤盘中，使用生理盐水或PBS缓冲液进行洗涤，去除切片上的血块和其他污物。 2. 将组织片依次浸泡在70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇(多次)中，每个浓度的乙醇中浸泡的时间要逐渐加长，以达到完全脱水的目标。此步骤至少需要30分钟。 3. 在完全脱水后，将组织片放入靛紫(或铁血素等)溶液中浸泡过夜。这是为了让样本进一步脱水，并增强其颜色。 染色： 4. 第二天将组织片从溶液中取出，并在自来水下冲洗几分钟。然后将其放入0.1%酸性橙G (或苏木精等)溶液中浸泡5-10分钟。 5. 再次用自来水冲洗组织片数秒钟，接着用70%乙醇中浸泡30秒钟。这是为了去除多余的染料。 6. 将组织片从70%乙醇转移到95%乙醇溶液中，每个容器中浸泡时间都应该为10-15秒钟，最后将其置于100%乙醇中浸泡2-3次，每次时间大约也是10-15秒。 7. 最后使用苯胺或其他透明化剂，清洗过样品后封片即可。 此外，针对您提到的裂片问题，建议在切片时调节刀片角度和厚度，注意在切 发自小木虫Android客户端 |
3楼2023-04-16 13:21:19
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出现肝切片裂片的原因可能有很多，以下是一些可能导致这种情况的原因以及相应的解决方法： 1. 刀片角度：如果刀片夹角或者倾斜角度不正确，就会导致切片时组织被拉伸或者压缩，从而容易出现裂片现象。建议检查切片机的刀片是否安装正确，以及切割速度和参数设置是否合适。 2. 组织固定不彻底：如果在组织处理过程中未完全固定、脱水和包埋，也容易引起切片时组织裂片。建议在处理样品前确保固定充分并按照标准程序进行脱水和包埋，避免在这个过程中出现问题。 3. 组织质量差：如果使用的组织质量较差或者老化严重，其弹性也会降低，容易造成切割时组织变形和裂片。在进行实验前应该检查组织质量是否符合要求，并选择质量好的样品进行操作。 4. 刀片钝化：如果使用的刀片已经钝化或者损坏，就会使得切割不平整、毛糙、甚至出现裂片。建议及时更换刀片，避免使用过程中切割质量下降。 5. 切片方向：肝脏组织在不同的方向上具有不同的硬度和弹性，如果选择不合适的切片方向，就容易出现裂片现象。建议根据自己的实验目的和样品特点选择合适的切片方向。 总之，在进行HE染色肝切片时，应该严格按照实验操作规范进行操作，避免影响实验结果。如果出现问题，及时查找原因并采取相应措施解决。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2023-04-16 13:22:48
5楼2023-04-18 17:35:32
6楼2023-04-18 17:35:53
用户晓晓
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7楼2023-04-20 01:16:05
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