| 查看: 3061 | 回复: 5 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
α-葡萄糖苷酶抑制活性实验 已有1人参与
|
||||
|
一、目前在体系优化，遇到的问题是：未出现平台期，每次实验所得数据有一定差距，曲线趋势不统一，无法确定最适酶浓度和底物蔗糖浓度，希望有前辈能提些建议。 二、实验用的方法是： ①0.1M的PBS 70ul和20ul酶混合预热10min,（空白组为不加酶，其他条件皆一致） ②加入20ul蔗糖反应30min， ③加入100ul的0.2M的碳酸钠终止，（以上反应在1.5ml的离心管内完成，与在酶标板内反应所得数据对比而言，前者反应更充分） ④取50ul反应液，往其中加入150ul葡萄糖工作液，再反应15min后酶标仪测OD。 三、但在体系优化这个环节就出现了问题，我参考文献，选取1.0U/ml的酶，加入不同浓度蔗糖（10、20、40、60、80、100、120、140、160mmol/l）但没有平台期，蔗糖60与80这边较平，但160的OD又很高。之后又重复了好几次，但是曲线规律不统一，仍然无法确定最适蔗糖浓度，但文献里又做出来了，不清楚我到底漏了什么细节，希望做过类似实验的前辈能指导一下。（ps先前我增加过终止液的浓度后，发现有平台期，但是测出来的数据太小了，意义不大。) @lifeliuyan 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
泣血叩求调剂恩，愿以丹心报师恩
已经有3人回复
-
274求调剂0856材料化工
已经有6人回复
-
0856化工原理
已经有3人回复
-
291分兽医专硕 一志愿华中农
已经有3人回复
-
工科0856专硕化学工程269能调剂吗
已经有8人回复
-
341求调剂
已经有3人回复
-
接受26届调剂生
已经有23人回复
-
311求调剂
已经有5人回复
-
308求调剂
已经有3人回复
-
271求调剂
已经有3人回复
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19435.4
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6583
- 在线: 2775.3小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
茯苓鸭: 金币+5 2021-02-19 21:47:41
茯苓鸭: 金币+5 2021-02-19 21:47:41
|
1. 葡萄糖氧化酶法是基于生物催化的方法来测定葡萄糖的含量，受pH的影响，所以试剂盒的说明书里是建议受测样品体积：GOD试液=1：10。在测定抑制剂效力的反应时间到了之后加入碳酸钠会使pH值升高，但你在使用GOD试液的时候却是受测样品体积：GOD试液=1：3，GOD试液自带的缓冲系统不足以抵消样品所带缓冲液的冲击，使GOD的显色反应不能在最适pH进行，建议参考说明书进行。 2.我用过GOD法，是反应时间到了之后沸水浴灭活，受测样品体积：GOD试液=1：10。我也试过加碳酸钠来制止反应，但最终选择了沸水浴。 3.GOD法是有线性范围的，葡萄糖的含量超过一定范围后线性变差，在葡萄糖含量倍增时，增加的读数值小于1倍，并且在葡萄糖含量继续倍增后读数的增幅继续减小。即，假设葡萄糖含量为0、1、2、4、8、16，读数可能为0、1、2、4、7、10，含量为8时已超出该方法的线性范围。线性范围受显色温度和时间影响，要自己摸索，并注意所得结果能够重现。 4.你的步骤描述不全面，抑制剂在哪一步加？你以蔗糖作为α-葡萄糖苷酶的底物？要描述全面才行。 |
6楼2021-01-27 16:58:00
