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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 用DNS法测定半纤维素酶的活性
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s7145815

金虫 (初入文坛)

[求助] 用DNS法测定半纤维素酶的活性 已有1人参与

在用DNS法测定半纤维素酶活性的实验中，采用的是紫外可见分光光度计测量仪器，在建立标线时，GB上的测定的是540nm的吸光度，而我做的实验是在471-479nm之间有吸光度，且随着木糖浓度的增大，最大吸光度出现了右移的情况。请问各位大神，有没有这方面的经验，求指点。
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1楼 2020-12-15 11:06:34
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复旦研究院

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
和光强度、检测器灵敏度、响应限有关。仪器所能检测的始终都是溶液的透光率，吸光度是换算的。在浓度非常高的时候，溶液的透光率在2%以下，以氘灯/钠灯为光源，用光栅分波长的话，仪器测得的电压大概在0.1mV，这个时候多那么个0.1%和0.2%差别很大吗？很多检测器测不出来的。这个时候按照分光光度计测量值绘标准曲线图就会发现高浓度部分向下偏离曲线。表现在HPLC上就是平头峰。
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样品测试分析随时木虫私信我 :)
2楼2020-12-15 16:25:31
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s7145815

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 复旦研究院 at 2020-12-15 16:25:31
和光强度、检测器灵敏度、响应限有关。仪器所能检测的始终都是溶液的透光率，吸光度是换算的。在浓度非常高的时候，溶液的透光率在2%以下，以氘灯/钠灯为光源，用光栅分波长的话，仪器测得的电压大概在0.1mV，这个时 ...

就是说偏移是正常的？
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3楼2020-12-17 09:11:05
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