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真诚求问：请问DNA加合物相对定量色谱质谱上具体怎么计算？ 已有1人参与
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真诚求问各位大佬， DNA加合物定量方面的问题... 目前知道的有绝对定量和相对定量两种方式。 绝对定量目前流行的方式是稳定同位素稀释法，即通过已知浓度的同位素内标标样去定复杂基质中的加合物的绝对含量（其实具体的计算方法也是很懵圈） 相对定量有两种说法，一是算，UV-Vis先测DNA的含量，然后计算大概有多少个正常核苷酸，然后通过外标法或者内标法吧，计算百分比；二是说用LC-MS/MS直接测核苷的响应，算出百分比.....（是否是这样也不清楚...） 小妹真的对这块真的十分懵圈，实在是找不到同门问，毕业在即，痛苦万分。 而且目前很大的困难是标样不全，要检测4种加合物并且算它们之间的比值，目前只有2种标样，想了各种方法实在是能力有限；更别提同位素标样，完全没有；化合物本身毒性很大，再去标样合成几乎没戏...... 相对定量是说 我有核苷标准品，然后称重溶解算浓度，逐级稀释，用和待测加合物同样的色谱方法，找母子离子，优化它的MRM峰形保留时间，然后做它的工作曲线，然后之后再做实验的时候，水解DNA成核苷，上质谱看响应，通过工作曲线算出正常核苷的浓度吗？一般来说都是说XX个加合物/xx个正常核苷，这个 个是怎么算出来的？ 难道是通过阿佛加德罗常数吗... 这样岂不是误差非常大？ 以及方法学考察部分，标样不全，能做多少呢？还有可信度吗？硕士毕业论文根本实验都做不全，没法毕业也没法出文章阿。 十分煎熬！ 希望有一步步的类似于protocol的教导，万分感谢！ |
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