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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » DNA沉淀问题
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书 呆 子

新虫 (小有名气)

[求助] DNA沉淀问题 已有1人参与

dna沉淀用2.5倍预冷无水乙醇-20摄氏度一小时；用1/10体积+2倍预冷无水乙醇-20摄氏度一小时；预冷异丙醇20摄氏度一小时这三个方法都试了，有的会结冰。为啥没有白色沉淀，都是透明丝状的，就感觉不会很好凝集沉淀，有的时候也会有一些白色沉淀，搞不清楚。哪位大神帮帮忙。图片对应上面的方法

DNA沉淀问题


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1楼 2020-11-24 15:57:04
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书 呆 子

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-11-24 18:02:35
真正的DNA沉淀是半透明的丝状。但是一般实验过程中DNA沉淀往往会带一些盐，所以会有白色沉淀。少量半透明的DNA沉淀肉眼是很难看到的，事实上大部分情况下沉淀都不容易看到，楼主能看到沉淀说明DNA含量很高。
楼主的 ...

前辈，我想问下，有没有更好的沉淀DNA的方法

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3楼2020-11-25 07:46:39
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
真正的DNA沉淀是半透明的丝状。但是一般实验过程中DNA沉淀往往会带一些盐，所以会有白色沉淀。少量半透明的DNA沉淀肉眼是很难看到的，事实上大部分情况下沉淀都不容易看到，楼主能看到沉淀说明DNA含量很高。
楼主的胶没有标注所以看不懂，但是可以看到左边三条泳道DNA没有完全溶解，所以会出现从长长的拖尾，这是一边溶解一边跑胶的结果。较大的DNA在沉淀后，有时不易重新溶解在水中。
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书 呆 子
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2020-11-24 18:02:35
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
3楼: Originally posted by 书 呆 子 at 2020-11-25 07:46:39
前辈，我想问下，有没有更好的沉淀DNA的方法
...

70-75%乙醇沉淀就是很好的DNA沉淀方法，异丙醇沉淀速度快但是按收率讲不优于乙醇沉淀。
你的第二种沉淀方法里，乙醇百分比过高，会导致大量盐分和小分子也跟着沉淀。虽然能够沉淀DNA但是不能除去杂质的话，沉淀DNA就失去意义了。
如果楼主纠结于收率不佳的话可以考虑从其他方面入手，比如：延长沉淀孵育时间，确保在4度进行离心，延长离心时间，吸取上清时用枪头抵着沉淀相对的另一侧缓慢操作等等。
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2020-11-25 10:11:14
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