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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 荧光共振能量转移探究蛋白互作
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奥赛班

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光共振能量转移探究蛋白互作 已有2人参与

目的蛋白A和B已分别连接上CFP与YFP，转入细胞内并已表达，目前使用共聚焦显微镜能够分别看到青色及黄色荧光
但是只使用青色荧光的激发光时，只能够看到青色荧光，而无法看到黄色荧光，有的样品能够看到青色荧光减弱 但是怎么能够看到能量转移产生的黄色荧光从而判断A和B之间有互作呢？

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1楼 2020-11-13 22:07:31
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

做FRET要定量计算，把两个不同波长的发射光强度做除法，并进行大量细胞的统计。FRET的变化程度有时候没那么强。
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2020-11-26 13:31:46
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能看到他们co-localization吗？ 如果在细胞内分布高度co-localization，是很强的证据吧
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2020-11-14 11:28:19
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奥赛班

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2020-11-14 11:28:19
能看到他们co-localization吗？ 如果在细胞内分布高度co-localization，是很强的证据吧

因为是过表达的，看不清楚co-localization
还是对共聚焦显微镜的原理及使用太不熟练了

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3楼2020-11-26 13:17:47
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