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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我的16S rRNA PCR做不出来了
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hunzi-liu

新虫 (初入文坛)

[交流] 我的16S rRNA PCR做不出来了

taq酶和体系是takara的，仪器是伯乐的。
我做的是细菌，最近16S做不出来。用同样的DNA模板和体系扩其他基因可以扩出来，但是扩16S就是扩不出来，连引物二聚体都没有。之前想过引物失活，换了一对新的引物还是没有做出来。
敢问各位高手，这可能是什么原因啊？
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1楼 2009-07-23 13:56:02
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guoab12

银虫 (小有名气)
★
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提取的DNA有问题还是试剂的问题 重新提DNA用新的试剂 16S还是比较好做的
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2楼2009-07-23 14:00:37
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hunzi-liu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by guoab12 at 2009-7-23 14:00:
提取的DNA有问题还是试剂的问题 重新提DNA用新的试剂 16S还是比较好做的

可是同样的DNA模板扩别的基因是可以的呀~而且结果很好
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3楼2009-07-23 14:38:22
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churmi

银虫 (正式写手)
那就证明模版没问题喽！再试试别的条件！

加油，相信一定可以喽！
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4楼2009-07-23 17:31:03
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weilin2378

木虫 (小有名气)
★
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降低退火温度试试，我最低用过42度
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5楼2009-07-23 18:17:14
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smallcat227

木虫 (著名写手)
降低退火温度，延长延伸时间到90s
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6楼2009-07-24 08:36:40
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wuchuqiu

铁虫 (小有名气)
★
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估计问题在引物上，用的是自己设计的引物还是别人设计的。
你是做鉴定吗，文献上查出来的通用引物效果比较好
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7楼2009-07-24 14:56:25
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freshair33

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是不是细菌是真菌啊，那就应该扩增18s rDNA了
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8楼2009-07-24 16:33:53
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zhouweiwei

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的引物是什么， 用细菌的通用引物很容易就做出来的。试试细菌的通用引物吧。你想批多大的基因片段，引物的长度是不一样的
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9楼2009-07-26 09:38:29
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