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求助多肽超滤分离的经验
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各位好,本人最近在做多肽的分离纯化。分别用10K和3K的超滤离心管（5000 x g）对多肽酶解液进行分离后发现10K以上和3K-10K的含量很高，而3K以下的很少。但是用液相测分子量分布显示3K以下的应占比90%以上，是离心管的问题吗，提高浓度的话膜上会出现沉淀。3K以下的由于浓度很低冻干后只能得到一点点样品，而且会黏在容器上很难收集，只能用勺子刮下一团很黏的东西，有没有什么能够浓缩的方法，旋蒸可以吗。之后打算用超滤膜做，担心会出现同样的问题。想问问我应该如何收集3K以下的多肽。附上我冻干后3K以下的样品，我是在塑料培养皿上用保鲜膜包住然后扎了几个小孔后进行冻干的。 3K以下.jpg |
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【答案】应助回帖
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wolfghost: 博学EPI+1 2021-02-26 14:23:10
| 说明不是酶解工艺的问题，而是超滤过程中的问题：1.超滤前确保溶液澄清，多离心几次或过一次陶瓷膜，去除更多杂质或大分子物质；2.超滤时，进行稀释3倍左右过膜，减少在膜上面结垢，影响过膜质量；3.确保膜的质量，是否是好的；4.超滤时，注意超滤一定体积的溶液后，进行膜清洗，具体怎么操作，要根据自己的样品、膜的性能决定。希望以上经验能帮到你！ |
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