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perennials

金虫 (正式写手)

[交流] 细胞冻存/复苏问题

按照培养基: 血清: DMSO=7:2:1冻存未长满的7703人肝癌细胞
4度30min
-20度30min
-70过夜
液氮
复苏时也是直接放在37度水中
但是没活,不知道该如何改善
有人在冻存方面有经验或者诀窍可分享嘛?

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-4 at 15:37 ]
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xywmusic

至尊木虫 (文坛精英)

纯纯家族之纯虎


perennials(金币+1,VIP+0):谢谢,不过离心步骤要加这么多培养基吗?冻存液1ml,那就是要加10ml了? 7-23 09:13
(二) 细胞复苏
1. 从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀;
3. 离心, 1000rpm,5min;
4. 弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养;
5. 次日更换一次培养液,继续培养。
吾日三省乎吾身:高吗?富吗?帅吗?呃,洗洗睡吧~~太久没摸女孩手,攥个泡椒凤爪都觉温柔纤细,舍不得往嘴里塞。
2楼2009-07-22 18:05:44
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xywmusic

至尊木虫 (文坛精英)

纯纯家族之纯虎

注意第一步中的“不时摇晃令其尽快融化”
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。
吾日三省乎吾身:高吗?富吗?帅吗?呃,洗洗睡吧~~太久没摸女孩手,攥个泡椒凤爪都觉温柔纤细,舍不得往嘴里塞。
3楼2009-07-22 18:08:54
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liujun1028

捐助贵宾 (著名写手)


perennials(金币+1,VIP+0):谢谢,另外你说5份血清,是指培养基:血清:DMSO=4:5:1吗? 7-23 09:16
看你的实验步骤没有问题,问题是你的细胞状态如何,是不是处于旺盛的增长期,消化时不要过头。血清加到5份吧,细胞活力会更好。我们用血清:DMSO=9:1冻胎儿成纤维最好!记住解冻2min以内完成。
4楼2009-07-22 18:45:08
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