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Endeavour__

至尊木虫 (职业作家)

[求助] sgRNA设计请教 已有1人参与

CRISPR新手。
已知 sgTelomere-GTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTA。 怎么设计完整的 sgRNA的完整序列？有没有相关文献？我只查到这个靶向序列，但PAM等是怎样的呢？有没有直接的文献？
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1楼 2020-10-15 19:27:22
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Endeavour__

至尊木虫 (职业作家)
2楼2020-10-15 19:29:47
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泡沫12

新虫 (小有名气)
PAM位点，就是NGG序列，N代表任何一种核苷酸，合成的gRNA不能包括NGG

发自小木虫IOS客户端
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3楼2020-10-18 16:42:34
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

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Endeavour__: 金币+50, ★有帮助 2020-11-03 08:36:37
引物设计方法取决于你用的载体质粒
最常用的是张峰的plenti-crispr体系，克隆这个sgRNA质粒对应的载体设计请看以下链接的说明书：
https://media.addgene.org/data/p ... nt_B3xTwla0bkYD.pdf
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2020-10-21 10:33:49
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Endeavour__

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-10-21 10:33:49
引物设计方法取决于你用的载体质粒
最常用的是张峰的plenti-crispr体系，克隆这个sgRNA质粒对应的载体设计请看以下链接的说明书：
https://media.addgene.org/data/plasmids/52/52961/52961-attachment_B3xTwla0b ...

试剂盒与质粒合成合成出来的序列完全一致吗？ 试剂盒合成的序列也具有 S. pyogenes terminator序列吗？
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5楼2020-10-28 10:41:15
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Endeavour__

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 泡沫12 at 2020-10-18 16:42:34
PAM位点，就是NGG序列，N代表任何一种核苷酸，合成的gRNA不能包括NGG

试剂盒与质粒合成合成出来的序列完全一致吗？ 试剂盒合成的序列也具有 S. pyogenes terminator序列吗？
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6楼2020-10-28 10:41:41
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