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mirar

新虫 (小有名气)

[交流] 求助虫友 已有1人参与

各位虫友有没有人用qiagen试剂盒做过咽拭子提取rna的实验呀,样本处理是怎么进行的呢?做了两次扩增曲线都不光滑,郁闷

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junjieshao

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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2楼2020-10-01 05:47:35
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mirar

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by junjieshao at 2020-10-01 05:47:35
以前常做,qiagen抽提这一步应该没问题。
一个是rna含量怎么样,咽拭子泡在什么保存液里面。
另外一个是RT和pcr灵敏度怎么样?
有时候用外围引物先扩增个5-10个循环(nest)。

咽拭子是泡在病毒保存液中的,我是自己先spike的样本,之前建立的反应体系灵敏度是ok的,添加的样本在原反应体系中扩增是没问题的。现在1是扩增曲线不光滑,二是咽拭子中的非靶标rna显示不扩增,至于您提到的rna浓度,由于提取过程中加了carrier rna ,我没办法测浓度,还拜托前辈指点

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3楼2020-10-01 10:32:14
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