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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助虫友
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mirar

新虫 (小有名气)

[交流] 求助虫友 已有1人参与

各位虫友有没有人用qiagen试剂盒做过咽拭子提取rna的实验呀，样本处理是怎么进行的呢？做了两次扩增曲线都不光滑，郁闷

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1楼 2020-09-30 09:03:46
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
2楼2020-10-01 05:47:35
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mirar

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junjieshao at 2020-10-01 05:47:35
以前常做，qiagen抽提这一步应该没问题。
一个是rna含量怎么样，咽拭子泡在什么保存液里面。
另外一个是RT和pcr灵敏度怎么样？
有时候用外围引物先扩增个5-10个循环（nest）。

咽拭子是泡在病毒保存液中的，我是自己先spike的样本，之前建立的反应体系灵敏度是ok的，添加的样本在原反应体系中扩增是没问题的。现在1是扩增曲线不光滑，二是咽拭子中的非靶标rna显示不扩增，至于您提到的rna浓度，由于提取过程中加了carrier rna ，我没办法测浓度，还拜托前辈指点

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3楼2020-10-01 10:32:14
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