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moonway111

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 宏基因组相关问题

有谁在构建宏基因组时,提取过HMW基因组DNA?
最终得到的基因组是留在了琼脂糖的Plug中,还是在TE缓冲液中?
如果是存留在琼脂糖Plug中,如何电洗脱回收基因组DNA时进行酶切?
恳请各位虫友赐教,谢谢!
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能喝半斤喝八两,这样的干部要培养;能喝八两喝半斤,这样的干部不放心。
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)

★ ★
moonway111(金币+2,VIP+0):谢谢虫友赐教! 7-19 15:51
引用回帖:
Originally posted by moonway111 at 2009-7-18 16:56:
有谁在构建宏基因组时,提取过HMW基因组DNA?
最终得到的基因组是留在了琼脂糖的Plug中,还是在TE缓冲液中?
如果是存留在琼脂糖Plug中,如何电洗脱回收基因组DNA时进行酶切?
恳请各位虫友赐教,谢谢!

HMW提取细菌 或者 植物组织的时候,都要预先包埋到低熔点胶里面.植物组织需要磨碎,并且需要计数细胞核的密度.

基因组留在Plug里面.

包含有DNA的Plug分成许多小块,然后取少量进行酶切条件的摸索.摸索好了后进行大量酶切.

然后跑 电泳或者脉冲场电泳,切下目的大小的DNA,将胶块装入透析袋中进行电洗脱.洗脱完毕后收集袋子里面的洗脱液,沉淀.
3楼2009-07-19 09:25:34
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moonway111

铁杆木虫 (著名写手)

微笑漩涡您好!
取小量含有DNA的plug小块进行酶切的时候,是如何操作的?
还需要把胶溶解吗?
你所谓的摸索条件是不是摸索酶切时间呀?
不胜感激!
能喝半斤喝八两,这样的干部要培养;能喝八两喝半斤,这样的干部不放心。
4楼2009-07-19 15:54:57
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by moonway111 at 2009-7-19 15:54:
微笑漩涡您好!
取小量含有DNA的plug小块进行酶切的时候,是如何操作的?
还需要把胶溶解吗?
你所谓的摸索条件是不是摸索酶切时间呀?
不胜感激!

酶切的时候将胶块放在裂解液里面置于适当温度于恒温箱缓缓摇动.
o(∩_∩)o...这个是大马甲,不要溶解LMP胶,用少量的胶块摸索,但是胶块大小要等体积放大.
一般不是摸索酶切时间,而是设置不同的酶量,固定时间.

祝好运.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-07-19 19:22:32
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moonway111

铁杆木虫 (著名写手)

brightfuture01您好!请问您所提到的裂解液是怎么配置的?
非常感谢!
能喝半斤喝八两,这样的干部要培养;能喝八两喝半斤,这样的干部不放心。
6楼2009-07-20 08:08:09
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