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紫玉涵轩

铜虫 (小有名气)

[求助] 杆状病毒系统表达的蛋白不分泌到胞外,怎么大规模纯化? 已有1人参与

求有经验的大神:
我最近在做几个蛋白的杆状病毒表达系统,其中做了一个EGFP的蛋白作为阳性对照,前期试验很顺利,细胞观察到了明显的病变,而且在荧光显微镜下EGFP是有大量荧光的;但是在用SDS-page检测上清中蛋白表达时间的时候,并没有看到与对照细胞明显的差异条带,是我的蛋白都没有分泌到上清中,而是存在于胞内吗?如果是这样的话,能通过什么方法大量纯化呢?或者怎么改进让它分泌到胞外呢?(我前面添加了蜂毒信号肽序列和His-标签)
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

从细胞提取蛋白,纯化。如果目的蛋白形成包涵体,就用尿素洗涤溶解的方式纯化。
2楼2020-09-02 11:47:09
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