24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 812  |  回复: 1
【悬赏金币】回答本帖问题,作者紫玉涵轩将赠送您 5 个金币

紫玉涵轩

铜虫 (小有名气)

[求助] 杆状病毒系统表达的蛋白不分泌到胞外,怎么大规模纯化?已有1人参与

求有经验的大神:
我最近在做几个蛋白的杆状病毒表达系统,其中做了一个EGFP的蛋白作为阳性对照,前期试验很顺利,细胞观察到了明显的病变,而且在荧光显微镜下EGFP是有大量荧光的;但是在用SDS-page检测上清中蛋白表达时间的时候,并没有看到与对照细胞明显的差异条带,是我的蛋白都没有分泌到上清中,而是存在于胞内吗?如果是这样的话,能通过什么方法大量纯化呢?或者怎么改进让它分泌到胞外呢?(我前面添加了蜂毒信号肽序列和His-标签)
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

从细胞提取蛋白,纯化。如果目的蛋白形成包涵体,就用尿素洗涤溶解的方式纯化。
2楼2020-09-02 11:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 紫玉涵轩 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
信息提示
请填处理意见