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TAQ酶厂商是怎么确定酶活性的？ 已有1人参与
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有没有厂商回答一下啊？ 荧光定量PCR？定性PCR？  esy-023635429.jpg |
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2楼2020-08-26 15:23:42
wangyuan0929
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aliaa2019: 金币+15, ★★★很有帮助, 确实是这样，放射性和国内荧光定量是两个最主要的方案，不过有具体点的方案么？ 2020-08-27 07:58:43
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aliaa2019: 金币+15, ★★★很有帮助, 确实是这样，放射性和国内荧光定量是两个最主要的方案，不过有具体点的方案么？ 2020-08-27 07:58:43
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https://www.douban.com/group/topic/151823150/ 大概思路是两种 1. 用放射性同位素/荧光基团标记的试剂来进行PCR，然后聚合结束后用电泳去除未用完的标记物，最后通过放射性强度或荧光强度来得到聚合酶的反应速度，从而计算酶活（U）。 2. 使用荧光染料插入双链DNA的特性，在聚合过程中使用qPCR设备追踪荧光强度变化曲线，从而推算酶促反应速度，并计算酶活。 |
3楼2020-08-26 16:36:34
junjieshao
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4楼2020-08-26 21:50:21
5楼2020-08-27 07:59:28
wangyuan0929
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【答案】应助回帖
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aliaa2019: 金币+5, ★★★很有帮助, 好的，谢谢你，1μCi (α-32 P）不好操作 2020-08-27 12:36:36
aliaa2019: 金币+5, ★★★很有帮助, 好的，谢谢你，1μCi (α-32 P）不好操作 2020-08-27 12:36:36
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sigma网站上有： https://www.sigmaaldrich.com/cat ... h®ion=CN Unit Definition 一个单位 Taq DNA 聚合酶定义为在上述试验条件下，+ 65°C 下 60 分钟 内将10nmol总脱氧核糖核苷三磷酸结合到酸可沉淀DNA中的酶量。 单位含量测定： 孵育缓冲液： 67 mM Tris/HCl；pH 8.3/25°C、5 mM MgCl 2 、10 mM 巯基乙醇、0.2% 聚乙醇、0.2 mg/mL 明胶、 dATP/dGTP/dTTP各0.2 mM 、以及 0.1 mM dCTP。 孵育程序： M13mp9ss、M13 引物 (17mer) 和 1μCi (α-32 P）dCTP 与 Taq DNA 聚合酶的适当稀释液在 50μl + 65℃ 孵育缓冲液孵育 60 分钟。通过三氯乙酸沉淀测定掺入的 dNTP 的量。 体积活度：1 U/μl |
6楼2020-08-27 10:43:01
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