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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 刚做转化不太顺利，求指导
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彼岸流年714

新虫 (正式写手)
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刚做转化不太顺利，求指导
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转化失败来网上逛一圈找找原因，老看到评论下看到一句话，转个空载体看看能长就是连接的问题，我咋这么看不懂这句话呢

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[ Last edited by 彼岸流年714 on 2020-8-5 at 20:29 ]
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1楼 2020-08-05 16:55:15
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彼岸流年714

新虫 (正式写手)
空载体和连接后的载体都有抗性基因呀，能看出啥问题，为啥是连接的问题呢

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3楼2020-08-05 17:00:41
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强仔123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 彼岸流年714 at 2020-08-05 17:00:41
空载体和连接后的载体都有抗性基因呀，能看出啥问题，为啥是连接的问题呢

没连进去？

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18楼2020-08-05 22:12:51
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木冰衿→_→

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实不只是空载体，其他质粒都行，做个阳性对照，如果其他质粒能转进去就说明不是你感受态的问题，那大概剧情是连接出问题了

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22楼2020-08-05 23:20:10
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彼岸流年714

新虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 强仔123 at 2020-08-05 22:12:51
没连进去？
...

不太清楚，第一次做今天刚做了几个对照明天再看看

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23楼2020-08-05 23:21:37
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彼岸流年714

新虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 木冰衿→_→ at 2020-08-05 23:20:10
其实不只是空载体，其他质粒都行，做个阳性对照，如果其他质粒能转进去就说明不是你感受态的问题，那大概剧情是连接出问题了

那我直接用感受态菌铺无抗性平板看是不是感受态的问题可以吧

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24楼2020-08-05 23:26:16
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强仔123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 彼岸流年714 at 2020-08-05 23:21:37
不太清楚，第一次做今天刚做了几个对照明天再看看
...

嗯嗯

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31楼2020-08-06 09:38:59
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zshky

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 彼岸流年714 at 2020-08-05 17:00:41
空载体和连接后的载体都有抗性基因呀，能看出啥问题，为啥是连接的问题呢

可以这样理解，试剂盒里的对照按照说明书一定会转化成功的，如果你做了对照，对照没长就说明是感受态出了问题，如果对照长了你自己的没长，那就说明是前面的步骤有问题，大概率就是连接出问题了，可能没连上，如果是TA 克隆，扩增目的片段要用taq酶，还有就是检查下目的目的片段是否纯化这类常规操作问题

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彼岸流年714
34楼2020-08-06 12:19:33
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彼岸流年714

新虫 (正式写手)
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引用回帖:
34楼: Originally posted by zshky at 2020-08-06 12:19:33
可以这样理解，试剂盒里的对照按照说明书一定会转化成功的，如果你做了对照，对照没长就说明是感受态出了问题，如果对照长了你自己的没长，那就说明是前面的步骤有问题，大概率就是连接出问题了，可能没连上，如果 ...

，明白啦

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38楼2020-08-06 19:45:40
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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
连了一个月都没连上

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40楼2020-08-12 17:42:28
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彼岸流年714

新虫 (正式写手)
引用回帖:
40楼: Originally posted by HK驱魔者 at 2020-08-12 17:42:28
连了一个月都没连上

表吓我，我刚送去测序了呢

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41楼2020-08-12 20:40:18
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abc8765244082楼
2020-08-05 16:57   回复  
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大大大蒙4楼
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落单候鸟14715楼
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1310040126楼
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Jzhang2137楼
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dan123qwe8楼
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秋土豆香9楼
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云在青天10楼
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tzynew11楼
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xtcao66814楼
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cloveg201626楼
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yandz68071730楼
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caizeyuan92232楼
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娜娜lyn36楼
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