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桧h桧桧

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建突变文库,所用超级感受态的制备已有1人参与

用实验室自制的氯化钙法感受态来构突变库,长菌量不太理想。经费原因,只能自己做感受态,看网上常见的Inoue法制备超级感受态似乎不适合BL21啊。

有没有人好心人分享一下适合做BL21超级感受态的protocol 先在此谢过啦

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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

jm109我做过,效果不比公司差,只是保存时间没公司那么长

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2楼2020-07-21 14:08:30
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桧h桧桧

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by choujiaoqi at 2020-07-21 14:08:30
jm109我做过,效果不比公司差,只是保存时间没公司那么长

同学,请问你是用什么方法嘞。我看看bL21的适不适合

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3楼2020-07-21 15:12:04
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 桧h桧桧 at 2020-07-21 15:12:04
同学,请问你是用什么方法嘞。我看看bL21的适不适合
...

好像是 0.1M的氯化钙处理,时间是十五分钟到半小时吧。具体你看一下分子克隆原版的书,上边有详细步骤

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4楼2020-07-21 17:43:03
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一,建库一般使用电转感受态,电转感受态制作很简单,菌液OD长到0.6后预冷,使用预冷的去离子水洗三遍就行了;第二,BL21(DE3)转化效率本身就不高,如果库容量到几十上百万,建议先转MC1061等菌株,刮板提取质粒后再转入BL21(DE3)进行筛选。
5楼2020-07-22 08:34:34
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