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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建突变文库，所用超级感受态的制备
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桧h桧桧

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建突变文库，所用超级感受态的制备 已有1人参与

用实验室自制的氯化钙法感受态来构突变库，长菌量不太理想。经费原因，只能自己做感受态，看网上常见的Inoue法制备超级感受态似乎不适合BL21啊。

有没有人好心人分享一下适合做BL21超级感受态的protocol 先在此谢过啦

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1楼 2020-07-21 13:57:05
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
jm109我做过，效果不比公司差，只是保存时间没公司那么长

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2楼2020-07-21 14:08:30
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桧h桧桧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by choujiaoqi at 2020-07-21 14:08:30
jm109我做过，效果不比公司差，只是保存时间没公司那么长

同学，请问你是用什么方法嘞。我看看bL21的适不适合

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3楼2020-07-21 15:12:04
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 桧h桧桧 at 2020-07-21 15:12:04
同学，请问你是用什么方法嘞。我看看bL21的适不适合
...

好像是 0.1M的氯化钙处理，时间是十五分钟到半小时吧。具体你看一下分子克隆原版的书，上边有详细步骤

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4楼2020-07-21 17:43:03
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一，建库一般使用电转感受态，电转感受态制作很简单，菌液OD长到0.6后预冷，使用预冷的去离子水洗三遍就行了；第二，BL21（DE3）转化效率本身就不高，如果库容量到几十上百万，建议先转MC1061等菌株，刮板提取质粒后再转入BL21（DE3）进行筛选。
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5楼2020-07-22 08:34:34
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