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[交流] 珍贵细胞污染防不胜防？即使亡羊也需补牢已有1人参与

各位老师们培养细胞时想必最头疼的就是各种污染问题，尤其是一些珍贵细胞，发现污染后更是欲哭无泪，有时候出现污染但是没有留心则会影响整个实验进度，所以小爱为大家挣了一下细胞培养出现的问题和处理方法，争取让老师们少走些弯路。

一、黑胶虫污染

因为小爱近期收到客户反馈实验细胞被黑胶虫污染导致实验无法进行，所以这边首先解一下黑胶虫污染，黑胶虫属于一种争议生物，有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。"黑胶虫"可寄生于动物细胞，也可以生存于中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。"黑胶虫"与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。老师们如果遇到培养基中被黑胶虫污染可以选择专门的除黑胶虫培养基来改善。

二、细菌污染

细菌污染是最常见的细胞污染，一旦实验环境杀菌处理不当，很大概率会引起细胞污染，根据污染的细菌形态不同，细菌污染后显微镜下观察结果也不同，其次，培养液发黄，变浑浊，可明显看见培养皿中有细沙状的沉淀物，时不时还有异样气味发出，如下图所示，可以在培养基中加入抗生素处理，可以用四环素，庆大霉素，或者链霉素，前两者的工作浓度是50 μg/mL;链霉素的工作浓度是100 μg/mL。但是，细胞自身可能会收到影响，因此预防污染是首要。

（图片转自生物女学霸）
三、真菌污染

真菌污染的培养基在早期不易观察，到中期出现丝状或絮状物时培养基已经污染严重，细胞基本已经死亡，发现后应立即将培养基处理掉，操作台紫外杀菌消毒，培养皿以及相关耗材放入高压蒸汽锅中灭菌处理。（霉菌同真菌一样）

四、支原体感染

培养液变浑浊，支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是细胞状态变差、生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生浑浊。细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。此时切断源头为关键，实验室进行全面灭菌处理，并换用支原体清除培养基进行实验。

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