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absinbio
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[交流]
有过辛辛苦苦培养的细胞因为冻存复苏失活的经历看过来
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细胞培养是个辛苦活，根本离不了人。新冠病毒肺炎疫情之下，不知道您实验室里养的细胞可还好？ 当然，合理运用细胞冻存和复苏技术可以帮助您省心度过假期。不过也有不少小伙伴向小爱哭诉，自己辛辛苦苦养的细胞冻存复苏后失活，复苏出来后活着的细胞就没几个了…… 辛辛苦苦好一阵、一夜回到解放前的感觉绝对不好受，那么细胞冻存复苏后失活的原因为何呢？我们又该如何去规避呢？ 其实目前实验室进行细胞冻存大多采用10%DMSO或甘油+10%到20%牛血清+培养基作为细胞冻存液，这种非玻璃化冻存的方式，操作中我们常规会注意慢冻快融以及分阶段降温等，但是冷冻过慢则引起细胞脱水失活，冷冻稍快又容易形成冰晶，无论如何都难以彻底避免细胞损伤。 与非玻璃化冻存相对的，细胞冻存最理想的方式无疑是超快速玻璃化冻存。 玻璃化冻存利用多种冷冻保护剂联合形成的玻璃化冷冻保护液保护悬浮细胞，当细胞内外玻璃化冷冻时，不会形成冰晶或只形成很微小的冰晶，不会对细胞膜和细胞器造成损伤。冻存细胞放-80℃冰箱24h后即可移至液氮罐长期保存。 限制细胞玻璃化冻存广泛应用的，主要是其需要配置较复杂的冻存液，且配方使用需经优化。这些烦心烦人的工作交给我们，现在，爱必信有心、有爱研发推出即用型无血清细胞冻存液（货号abs9417），无需程序降温，适用更广泛的细胞类型，尤其对干细胞以及原代细胞有极好的冻存效果。生产过程严格执行cGMP操作标准。 使用我们的细胞冻存液进行冻存和复苏操作相当简单。 1）细胞冻存操作方法： 选择对数生长期的细胞冻存，有助于提高细胞复苏存活率。 1、按照常规方法悬浮细胞或贴壁细胞收集于离心管中。 2、1000rpm-1500rpm，5min 离心，弃上清液。 3、加入适量的无血清细胞冻存液于离心管中，推荐细胞冻存浓度为 1×106 - 1×107 cells/ml。缓慢混合均匀，制成细胞悬液。 4、将离心管中的细胞混合液分装于已标示的冷冻保存管中。 5、将冻存细胞放入-80℃冰箱，24h后转入移至-196℃液氮罐长期冷冻保存。 2）细胞复苏操作方法： 1、从液氮罐取出冻存细胞，立即放入 37℃水浴锅或其他细胞复苏设备中，快速融化。 2、准备离心管，加入 2 倍冻存细胞体积的细胞培养基，待冻存管中细胞完全融化后，将冻 存细胞悬液缓慢加入离心管中。 3、1200-1500rpm 5min 离心，弃上清。 4、加入适量新鲜培养基，使用移液管缓慢悬浮细胞，并将细胞转染细胞培养皿/瓶中，显微镜下观察细胞状态，放入细胞培养箱中培养。 5、24h 后观察细胞状态，并更换新鲜细胞培养液。 同时，我们也研发推出了治疗级的无血清细胞冻存液abs9413，内毒素水平远低于药典标准，助力您的哺乳动物细胞和间充质干细胞的冻存。 如需冻存胚胎干细胞/诱导多能干细胞（ES/iPS）更推荐使用ES/iPS细胞冻存液（abs9412）。 辛辛苦苦培养的细胞，再也不会“一夜回到解放前”啦！ abs9417 无血清细胞冻存液（科研级） abs9413 无血清细胞冻存液（治疗级） abs9412 ES/iPS细胞冻存液 |
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