24小时热门版块排行榜

返回列表

当前主题已经存档。

meimei2009

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 93
帖子: 11
在线: 1.6小时
虫号: 710652
注册: 2009-02-27
专业: shengwu

[交流] 酶活测定的方法，算法

请问酶活测定的方法，具体算法
能否举个简单例子说明，谢谢

回复此楼

» 猜你喜欢

假如你的研究生提出不合理要求已经有12人回复
实验室接单子已经有7人回复
全日制（定向）博士已经有5人回复
萌生出自己或许不适合搞科研的想法，现在跑or等等看？已经有4人回复
Materials Today Chemistry审稿周期已经有4人回复
参与限项已经有3人回复
对氯苯硼酸纯化已经有3人回复
所感已经有4人回复
要不要辞职读博？已经有7人回复
北核录用已经有3人回复

1楼 2009-07-15 14:17:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

liujunhero

新虫 (文学泰斗)

博学EPI: 1
应助: 496 (硕士)
贵宾: 1.109
金币: 216791
散金: 2000
红花: 244
沙发: 1
帖子: 92937
在线: 1579小时
虫号: 480354
注册: 2007-12-15
专业: 食品科学

★
meimei2009(金币+1,VIP+0): 7-15 14:41

氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶（SOD）活力

一、原理
超氧物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。

二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料；水稻或小麦叶片
（二）仪器设备：1.高速台式离心机；2.分光光度计；3.微量进样器；4.荧光灯（反应试管处照度为4000Lx）；5.试管或指形管数支。
（三）试剂
1. 0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）；
2. 130mmol/L 甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml；
3.750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存；
4. 100μmol/L EDTA－Na2溶液：称取0.03721gEDTA－Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；
5. 20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml避光保存。

三、实验步骤
1. 酶液提取取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5ml。取1.5～2ml于1000rpm下离心20min，上清液即为SOD粗提液。
2. 显色反应取5ml指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按下列加入各溶液：试剂（酶）用量（ml）终浓度（比色时）0.05mol/L 磷酸缓冲液1.5130mmol/L Met溶液0.313mmol/L 750μmol/L NBT溶液0.375μmol/L 100μmol/L EDTA－Na2液0.310μmol/L 20μmol/L 核黄素0.320μmol/L 酶液0.052支对照管以缓冲液代替酶液蒸馏水0.25总体积3.0混匀后将1支对照管置暗处，其它各管于4000Lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时延长）。
3. SOD活性测定与计算至反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管的吸光度。

四、结果计算
已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。SOD总活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt)
上式中，SOD比活力＝SOD总活性蛋白质含量式中SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以酶单位／mg蛋白表示Ack照光对照管的吸光度AE样品管的吸光度V样品液总体积（ml）Vt测定时样品用量（ml）W样鲜重（g）蛋白质含量单位为：mg蛋白／g鲜重。

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2009-07-15 14:31:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

llyz0825

木虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 5292.5
散金: 10
红花: 2
帖子: 1367
在线: 37.5小时
虫号: 781962
注册: 2009-05-29
专业: 药物化学

★
meimei2009(金币+1,VIP+0):太简单了 7-15 14:42

1. 酶液制备取1.0g植物叶片剪碎，按1∶3（W/V）加入预冷的50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用2层纱布过滤，滤液离心（4000×g）10min，上清液作酶粗提液供测定。

2. 酶活性测定 3ml反应混合液中含50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH7.0），0.1mmol/L EDTA-Na2，0.3mmol/L AsA，0.06mmol/L H2O2和0.1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30秒内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2009-07-15 14:36:43

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖