| 查看: 441 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
酶活测定的方法，算法
|
|||
|
请问酶活测定的方法，具体算法 能否举个简单例子说明，谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生（3个名额）地质化工冶金领域
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有6人回复
-
不应该看fileCode
已经有9人回复
-
Filecode 又变了，巨变
已经有4人回复
-
分享一下我之前已中青C的计划书的filecode
已经有5人回复
-
FileCode能看出啥？
已经有26人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有11人回复
-
重要来源：本周末出结果
已经有9人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有14人回复
-
结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。
已经有4人回复
liujunhero
新虫 (文学泰斗)
- 博学EPI: 1
- 应助: 496 (硕士)
- 贵宾: 1.109
- 金币: 216791
- 散金: 2000
- 红花: 244
- 沙发: 1
- 帖子: 92937
- 在线: 1579小时
- 虫号: 480354
- 注册: 2007-12-15
- 专业: 食品科学
★
meimei2009(金币+1,VIP+0): 7-15 14:41
meimei2009(金币+1,VIP+0): 7-15 14:41
|
氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶（SOD）活力 一、原理 超氧物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料；水稻或小麦叶片 （二）仪器设备：1.高速台式离心机；2.分光光度计；3.微量进样器；4.荧光灯（反应试管处照度为4000Lx）；5.试管或指形管数支。 （三）试剂 1. 0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）； 2. 130mmol/L 甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml； 3.750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存； 4. 100μmol/L EDTA－Na2溶液：称取0.03721gEDTA－Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml； 5. 20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml避光保存。 三、实验步骤 1. 酶液提取 取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5ml。取1.5～2ml于1000rpm下离心20min，上清液即为SOD粗提液。 2. 显色反应 取5ml指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按下列加入各溶液：试剂（酶）用量（ml）终浓度（比色时）0.05mol/L 磷酸缓冲液1.5130mmol/L Met溶液0.313mmol/L 750μmol/L NBT溶液0.375μmol/L 100μmol/L EDTA－Na2液0.310μmol/L 20μmol/L 核黄素0.320μmol/L 酶液0.052支对照管以缓冲液代替酶液蒸馏水0.25总体积3.0混匀后将1支对照管置暗处，其它各管于4000Lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时延长）。 3. SOD活性测定与计算 至反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管的吸光度。 四、结果计算 已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。SOD总活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 上式中，SOD比活力＝SOD总活性蛋白质含量式中SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以酶单位／mg蛋白表示Ack照光对照管的吸光度AE样品管的吸光度V样品液总体积（ml）Vt测定时样品用量（ml）W样鲜重（g）蛋白质含量单位为：mg蛋白／g鲜重。 |
2楼2009-07-15 14:31:27
llyz0825
木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5292.5
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 1367
- 在线: 37.5小时
- 虫号: 781962
- 注册: 2009-05-29
- 专业: 药物化学
★
meimei2009(金币+1,VIP+0):太简单了 7-15 14:42
meimei2009(金币+1,VIP+0):太简单了 7-15 14:42
|
1. 酶液制备 取1.0g植物叶片剪碎，按1∶3（W/V）加入预冷的50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用2层纱布过滤，滤液离心（4000×g）10min，上清液作酶粗提液供测定。 2. 酶活性测定 3ml反应混合液中含50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH7.0），0.1mmol/L EDTA-Na2，0.3mmol/L AsA，0.06mmol/L H2O2和0.1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30秒内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性 |
3楼2009-07-15 14:36:43
wangdongd
金虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1758.2
- 散金: 14
- 红花: 1
- 帖子: 218
- 在线: 22.3小时
- 虫号: 471150
- 注册: 2007-11-30
- 专业: 能源化工
4楼2009-07-15 16:38:50
wxq_
金虫 (著名写手)
额的金币啊
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 492.3
- 散金: 75
- 帖子: 1635
- 在线: 5.8小时
- 虫号: 796566
- 注册: 2009-06-18
- 性别: GG
- 专业: 环境化工
5楼2009-07-16 08:39:09
wxq_
金虫 (著名写手)
额的金币啊
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 492.3
- 散金: 75
- 帖子: 1635
- 在线: 5.8小时
- 虫号: 796566
- 注册: 2009-06-18
- 性别: GG
- 专业: 环境化工
6楼2009-07-16 09:06:55
7楼2009-07-16 09:08:41
