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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助求助怎么扩增启动子序列！！！
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者重庆吴彦祖-将赠送您 5 个金币

重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助求助怎么扩增启动子序列！！！ 已有1人参与

按照教程在NCBI上找到了启动子序列之后，设计了2KB全长引物，结果一直得不到条带啊！！！也设置了梯度也没有条带

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2020-07-14 20:42:15
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重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)
条带如图所示

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2楼2020-07-14 20:43:17
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重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)
求助求助怎么扩增启动子序列！！！

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3楼2020-07-14 20:43:31
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重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)
求助求助怎么扩增启动子序列！！！-1

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4楼2020-07-14 20:44:38
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
是不是模板没提好，或者酶扩增不了2kb的呀

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5楼2020-07-15 10:55:10
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重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2020-07-15 10:55:10
是不是模板没提好，或者酶扩增不了2kb的呀

应该不是模版的问题，扩其他的基因都可以扩出来，目前还没有换过酶。不过ES Taq保真性挺好的，一般不会有问题

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6楼2020-07-15 19:38:39
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
多换几个酶试试，分子有点玄学

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7楼2020-07-15 23:24:41
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huxi_8

至尊木虫 (著名写手)
用基因组DNA扩增启动子，不能用cDNA

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huxi
8楼2020-07-16 05:54:09
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hy893647480

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1. 首先确定你的基因组DNA没问题。（可用其他引物测试下）
2.其次注意下你的退火温度
2.注意下所使用的酶，可以用高保真酶或者pfu酶试一下
Good luck~
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9楼2020-08-28 19:32:52
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