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重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助求助怎么扩增启动子序列!!!已有1人参与

按照教程在NCBI上找到了启动子序列之后,设计了2KB全长引物,结果一直得不到条带啊!!!也设置了梯度也没有条带

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)

2楼2020-07-14 20:43:17
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重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)

3楼2020-07-14 20:43:31
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重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)

4楼2020-07-14 20:44:38
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)

是不是模板没提好,或者酶扩增不了2kb的呀

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5楼2020-07-15 10:55:10
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重庆吴彦祖-

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2020-07-15 10:55:10
是不是模板没提好,或者酶扩增不了2kb的呀

应该不是模版的问题,扩其他的基因都可以扩出来,目前还没有换过酶。不过ES Taq保真性挺好的,一般不会有问题

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6楼2020-07-15 19:38:39
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)

多换几个酶试试,分子有点玄学

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7楼2020-07-15 23:24:41
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huxi_8

至尊木虫 (著名写手)

用基因组DNA扩增启动子,不能用cDNA

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huxi
8楼2020-07-16 05:54:09
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hy893647480

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1. 首先确定你的基因组DNA没问题。(可用其他引物测试下)
2.其次注意下你的退火温度
2.注意下所使用的酶,可以用高保真酶或者pfu酶试一下
Good luck~
9楼2020-08-28 19:32:52
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