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absinbio

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[交流] WB实验中的亮眼“彩虹”——预染蛋白marker 已有2人参与

蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过上样缓冲液处理，使组织或细胞样品中的蛋白质带上电荷，再进行凝胶电泳，根据不同分子量的蛋白质在电场中的迁移速率不同进行区分，后将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

总结起来，WB的简要步骤如下图所示：

图1. Western Blot简要操作步骤图

Western Blot实验结果的可靠与否，除目的蛋白条带清晰、无背景、杂带等干扰外，分子量大小是确定目的蛋白的重要参考因素之一。如何确定蛋白的分子量大小？我们需要用到蛋白分子量标准（蛋白Marker）来作为丈量蛋白分子量的“尺子”。并且，蛋白Marker也是实验中必须的阳性对照，Marker精确无误，实验结果才有说服力。

目前常用的蛋白Marker分为非预染蛋白Marker和预染蛋白Marker。非预染(Pre Mixed)蛋白Marker最先在实验室出现，它是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液（目标分子量也在这个范围内）。因为电泳过程中完全看不到，要和目标蛋白一起等到最后经过染色脱色后才能起指示作用，无法在实验中起预示作用，使用起来很不方便。

为了实时监测电泳动态，预染蛋白Marker应运而生。预染蛋白Marker（Prestained Marker），是将标准蛋白与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以肉眼直接观察到的一种蛋白分子量标准，根据颜色又分为多色预染蛋白Marker和单色预染蛋白Marker。预染蛋白Marker可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况，估计迁移率，在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全等。

好的预染蛋白Marker，最重要的两点就是条带清晰和位置准确；清晰的条带在电泳过程中，可以更好地提示我们电泳进程，并且在转膜后也可以作为转膜成功与否的判断标准；而位置准确是所有marker类产品的必备要求，只有“尺子”刻度精确，量出的结果才真实可靠，作为确认目的蛋白的重要参考手段之一，蛋白Marker位置准确，更是重中之重。当然，在满足这两个前提条件下，如果再可以满足保存时间长，不易降解，价格优惠等优点那就更好了。小编在这里为您推荐两款爱必信的金牌预染蛋白Marker：abs922，abs924，和金标准Thermo26616分子量基本上没有偏差，比其他公司的预染蛋白marker具有更准特性。同时，条带更为清晰锐利，上样量少也可显示出清晰条带。对比图如下：