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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 无痕敲除抗生素失效
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caichenggu

铁虫 (小有名气)

[求助] 无痕敲除抗生素失效

最近在用自杀质粒pk18mobsacb敲除红球菌的基因，在敲除一个目的基因后，再敲下一个基因的时候电转质粒后用卡娜霉素筛选的时候平板长出了大量菌落，挑取了一些菌落均为没有进行一轮同源交换的菌，而对照组没有转质粒的平板却没有菌生长，苦思冥想不知道什么原因，有哪位前辈曾经遇到过这种问题吗，请指教一下
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1楼 2020-07-08 16:45:55
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
红球菌有专门的敲除质粒系统吧

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2楼2020-07-08 17:03:31
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caichenggu

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by forhighbio at 2020-07-08 17:03:31
红球菌有专门的敲除质粒系统吧

这个质粒是可以的
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3楼2020-07-08 17:17:17
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
我公司一般用Sacb系列的质粒，敲除阴性菌

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4楼2020-07-08 20:06:44
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赤月雪

新虫 (小有名气)
这个质粒是经过两轮同源重组敲基因的啊，在卡那上能长，应该是经过一轮重组，你还得用15%蔗糖筛两轮重组后的阳性克隆啊

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5楼2020-07-12 01:21:13
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