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SDS碱裂解法原理
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SDS碱裂解法的原理？ 三个溶液的具体作用？我查了好多资料，有很多说的都不一样，我想要个准确的！ 溶液2中，氢氧化钠的作用？ 细胞被裂解是氢氧化钠起作用还是SDS起作用？还是二者都起作用？ 谢谢各位！ |
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2楼2009-07-14 10:53:22
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液Ⅰ 50mM 葡萄糖 / 10mM EDTA / 25mM Tris-HCl，pH=8.0 葡萄糖增稠，使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA 抑制DNase的活性。这一步溶液中还可以加入RNase，不受EDTA影响，并且可以在后续步骤中被除去 溶液Ⅱ 0.2M NaOH / 1% SDS 破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。 溶液Ⅲ 3M 醋酸钾 / 2M 醋酸 这一步的K置换了SDS（十二烷基磺酸钠）中的Na，得到PDS（十二烷基磺酸钾）沉淀；SDS易与蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质也沉淀了，同时基因组DNA也被PDS共沉淀 |
6楼2009-07-14 13:46:36