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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS碱裂解法原理
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shensc727

金虫 (小有名气)

[交流] SDS碱裂解法原理

SDS碱裂解法的原理？
三个溶液的具体作用？我查了好多资料，有很多说的都不一样，我想要个准确的！
溶液2中，氢氧化钠的作用？
细胞被裂解是氢氧化钠起作用还是SDS起作用？还是二者都起作用？
谢谢各位！
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1楼 2009-07-14 10:46:46
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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可以认为都有~~
这么碱的环境，细胞膜会出问题的
SDS又能把细胞膜的蛋白给变性了
两者这么ox自然裂解~
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2楼2009-07-14 10:53:22
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haichang

银虫 (小有名气)
★
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细胞膜组分为磷脂类物质  在碱性环境中  酯键断裂  
磷脂水解后 形成的长链脂肪酸及细胞中的蛋白等疏水性较强的物质  与SDS（类似表面活性剂的作用）结合，进而而便于DNA与疏水性物质的分离
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时不我待
3楼2009-07-14 11:21:40
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wql1828

木虫 (小有名气)

helix
★
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solutoin  1      葡萄糖  调节溶液渗透压
                    tris-Hcl   缓冲体系
                     EDTA   螯合金属离子
                     溶菌酶  降解细胞壁
solutoin  2   NAOH  碱性环境
                 SDS（表面活性剂）    SDS把细胞膜的蛋白变性
solution  3   kac 可以和sds反应  生成沉淀
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4楼2009-07-14 11:33:42
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ly888lsp

木虫 (小有名气)
★
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磷脂水解后 形成的长链脂肪酸及细胞中的蛋白等疏水性较强的物质  与SDS（类似表面活性剂的作用）结合，进而而便于DNA与疏水性物质的分离
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5楼2009-07-14 13:43:23
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
★
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液Ⅰ 50mM 葡萄糖 / 10mM EDTA / 25mM Tris-HCl，pH=8.0

葡萄糖增稠，使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA 抑制DNase的活性。这一步溶液中还可以加入RNase，不受EDTA影响，并且可以在后续步骤中被除去


溶液Ⅱ 0.2M NaOH / 1% SDS

破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。


溶液Ⅲ 3M 醋酸钾 / 2M 醋酸

这一步的K置换了SDS（十二烷基磺酸钠）中的Na，得到PDS（十二烷基磺酸钾）沉淀；SDS易与蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质也沉淀了，同时基因组DNA也被PDS共沉淀
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6楼2009-07-14 13:46:36
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