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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 不知道为什么转基因种子GFP含量和非转基因种子的一样多
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天使的茶

铁虫 (小有名气)
现在遇到了一个问题，就是通过提取总蛋白检测转基因种子GFP含量，结果发现非转基因种子与转基因种子的GFP含量几乎一样多。

通过紫外照射已经确定非转基因种子不含GFP，而转基因种子含有GFP。并且差异明显。

是不是蛋白提取过程中有问题？

我的方法是
Protein extraction buffer = 1M Tris, 5mM EDTA, 0.1% SDS + Proteinase inhibitors
1，把种子（大豆种子）放到离心管里，然后加入蛋白提取液，冰箱4度过夜。
2，第二天用研磨杵充分研磨，同时再加入等量蛋白提取液。
3，然后95度水浴20分钟。
4，之后离心15分钟，取上清，再离心15分钟。
5，最后取上清，得到蛋白液。

然后分别测总蛋白和GFP含量。最后得到GFP和总蛋白的比。

GFP测量用光谱仪，总蛋白测量用bradford。。

但是不仅仅是比很接近，连测出来的总蛋白和GFP的数值也很接近。

重复了好多次都是这个问题，和老板说过几次，但是老板不认为这个方法有问题。

请问具体问题在哪里？？？
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无
1楼2020-06-19 03:39:50
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