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天使的茶

铁虫 (小有名气)

现在遇到了一个问题,就是通过提取总蛋白检测转基因种子GFP含量,结果发现非转基因种子与转基因种子的GFP含量几乎一样多。

通过紫外照射已经确定非转基因种子不含GFP,而转基因种子含有GFP。并且差异明显。

是不是蛋白提取过程中有问题?

我的方法是
Protein extraction buffer = 1M Tris, 5mM EDTA, 0.1% SDS + Proteinase inhibitors
1,把种子(大豆种子)放到离心管里,然后加入蛋白提取液,冰箱4度过夜。
2,第二天用研磨杵充分研磨,同时再加入等量蛋白提取液。
3,然后95度水浴20分钟。
4,之后离心15分钟,取上清,再离心15分钟。
5,最后取上清,得到蛋白液。

然后分别测总蛋白和GFP含量。最后得到GFP和总蛋白的比。

GFP测量用光谱仪,总蛋白测量用bradford。。

但是不仅仅是比很接近,连测出来的总蛋白和GFP的数值也很接近。

重复了好多次都是这个问题,和老板说过几次,但是老板不认为这个方法有问题。

请问具体问题在哪里???
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