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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]原核表达如何减少包涵体
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
[quote]Originally posted by lxlian507 at 2009-7-14 09:46:
你诱导的时间是多长？
原核表达的时间过长，很容易产生包涵体的。
你试着缩短时间看看，或者做个时间梯度看看。 [/quot
谢谢   我试试吧
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11楼2009-07-14 15:01:39
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ly888lsp

木虫 (小有名气)
★
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分析你的蛋白，是否有二硫键等，有些蛋白是不适合在原核表达

也可试试MBP、NusA、Trx等促溶标签进行融合表达。
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12楼2009-07-14 16:40:26
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ly888lsp

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
IPTG诱导，加少量乳糖，在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。
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13楼2009-07-14 20:02:40
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xiaoguniang

金虫 (小有名气)
学习一下了！
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14楼2009-07-14 20:13:09
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ly888lsp at 2009-7-14 20:02:
IPTG诱导，加少量乳糖，在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。

谢谢   但是乳糖应该加多少呢？
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15楼2009-07-15 08:42:45
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欣如止水

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-07-13 10:35:43:
不用IPTG诱导，加少量乳糖，在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。

可以推荐些表达载体吗？我也听说含弱启动子的载体可能对包涵体的避免有作用。谢谢
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16楼2010-12-03 15:44:54
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欣如止水

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 飞侠8683 at 2009-07-13 11:00:53:
换一个表达载体

可以推荐一些载体吗？谢谢
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17楼2010-12-03 15:56:52
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dy_414

木虫 (正式写手)
★
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低转速，低温度，低诱导剂
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我坚信，rp是攒出来的
18楼2010-12-03 17:19:01
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jingcp200320

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果你一开始就是包涵体，根据我的经验，你想诱导表达成为上清的概率很小很小，除非你换载体，有时候换了也不行，真的，不过也许运气好就可以了，关键是要多试试几个载体，如果你表达的蛋白不是全蛋白，只是一段的话，最好开始的蛋白就是在亲水区，这样比较容易形成上清表达。至于乳糖的量，1L培养基加入2g足够！pH7.0，
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19楼2010-12-06 12:46:25
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jingcp200320

银虫 (小有名气)
pMAL-P2x载体非常好！
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20楼2010-12-06 12:47:04
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