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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[quote]Originally posted by lxlian507 at 2009-7-14 09:46:
你诱导的时间是多长?
原核表达的时间过长,很容易产生包涵体的。
你试着缩短时间看看,或者做个时间梯度看看。 [/quot
谢谢   我试试吧
11楼2009-07-14 15:01:39
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ly888lsp

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
分析你的蛋白,是否有二硫键等,有些蛋白是不适合在原核表达

也可试试MBP、NusA、Trx等促溶标签进行融合表达。
12楼2009-07-14 16:40:26
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ly888lsp

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
IPTG诱导,加少量乳糖,在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。
13楼2009-07-14 20:02:40
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xiaoguniang

金虫 (小有名气)

学习一下了!
14楼2009-07-14 20:13:09
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ly888lsp at 2009-7-14 20:02:
IPTG诱导,加少量乳糖,在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。

谢谢   但是乳糖应该加多少呢?
15楼2009-07-15 08:42:45
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欣如止水

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-07-13 10:35:43:
不用IPTG诱导,加少量乳糖,在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。

可以推荐些表达载体吗?我也听说含弱启动子的载体可能对包涵体的避免有作用。谢谢
16楼2010-12-03 15:44:54
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欣如止水

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 飞侠8683 at 2009-07-13 11:00:53:
换一个表达载体

可以推荐一些载体吗?谢谢
17楼2010-12-03 15:56:52
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dy_414

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
低转速,低温度,低诱导剂
我坚信,rp是攒出来的
18楼2010-12-03 17:19:01
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jingcp200320

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果你一开始就是包涵体,根据我的经验,你想诱导表达成为上清的概率很小很小,除非你换载体,有时候换了也不行,真的,不过也许运气好就可以了,关键是要多试试几个载体,如果你表达的蛋白不是全蛋白,只是一段的话,最好开始的蛋白就是在亲水区,这样比较容易形成上清表达。至于乳糖的量,1L培养基加入2g足够!pH7.0,
19楼2010-12-06 12:46:25
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jingcp200320

银虫 (小有名气)

pMAL-P2x载体非常好!
20楼2010-12-06 12:47:04
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