[求助]原核表达如何减少包涵体 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2009-07-14 15:01:39

ly888lsp

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3186.4
帖子: 249
在线: 18.7小时
虫号: 753876
注册: 2009-04-21
性别: GG
专业: 色谱分析

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

分析你的蛋白，是否有二硫键等，有些蛋白是不适合在原核表达

也可试试MBP、NusA、Trx等促溶标签进行融合表达。

12楼2009-07-14 16:40:26

ly888lsp

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3186.4
帖子: 249
在线: 18.7小时
虫号: 753876
注册: 2009-04-21
性别: GG
专业: 色谱分析

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

IPTG诱导，加少量乳糖，在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。

13楼2009-07-14 20:02:40

xiaoguniang

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 571
散金: 15
红花: 1
帖子: 155
在线: 40.8小时
虫号: 315295
注册: 2007-03-01
性别: MM
专业: 蔬菜学与瓜果学

学习一下了！

14楼2009-07-14 20:13:09

x8q4h11

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3989.7
散金: 28
红花: 1
帖子: 180
在线: 11.2小时
虫号: 710540
注册: 2009-02-27
性别: GG

引用回帖:

Originally posted by ly888lsp at 2009-7-14 20:02:
IPTG诱导，加少量乳糖，在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。

谢谢但是乳糖应该加多少呢？

赞一下

15楼2009-07-15 08:42:45

欣如止水

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 794.1
红花: 1
帖子: 87
在线: 13.7小时
虫号: 806072
注册: 2009-07-09
专业: 环境微生物学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by HarveyWang at 2009-07-13 10:35:43:
不用IPTG诱导，加少量乳糖，在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。

可以推荐些表达载体吗？我也听说含弱启动子的载体可能对包涵体的避免有作用。谢谢

16楼2010-12-03 15:44:54

欣如止水

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 794.1
红花: 1
帖子: 87
在线: 13.7小时
虫号: 806072
注册: 2009-07-09
专业: 环境微生物学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by 飞侠8683 at 2009-07-13 11:00:53:
换一个表达载体

可以推荐一些载体吗？谢谢

17楼2010-12-03 15:56:52

dy_414

木虫 (正式写手)

应助: 20 (小学生)
金币: 2316.5
散金: 26
红花: 4
帖子: 390
在线: 29.8小时
虫号: 830319
注册: 2009-08-18
性别: GG
专业: 基因表达调控与表观遗传学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

低转速，低温度，低诱导剂

我坚信，rp是攒出来的

18楼2010-12-03 17:19:01

jingcp200320

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 524.5
红花: 2
帖子: 218
在线: 12.6小时
虫号: 958529
注册: 2010-03-01
性别: GG
专业: 分子生物学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

如果你一开始就是包涵体，根据我的经验，你想诱导表达成为上清的概率很小很小，除非你换载体，有时候换了也不行，真的，不过也许运气好就可以了，关键是要多试试几个载体，如果你表达的蛋白不是全蛋白，只是一段的话，最好开始的蛋白就是在亲水区，这样比较容易形成上清表达。至于乳糖的量，1L培养基加入2g足够！pH7.0，

19楼2010-12-06 12:46:25

jingcp200320

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 524.5
红花: 2
帖子: 218
在线: 12.6小时
虫号: 958529
注册: 2010-03-01
性别: GG
专业: 分子生物学

pMAL-P2x载体非常好！

赞一下

20楼2010-12-06 12:47:04