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新虫 (初入文坛)

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[交流] 成骨细胞诱导实验细节曝光，先睹为快！已有1人参与

一、成骨细胞诱导介绍

培养器皿表面的明胶包被：
为了避免诱导过程中MSCs出现漂浮现象，建议对成骨诱导使用的培养器皿表面进行明胶包被。

操作：

1、加适量0.1%明胶到培养器皿中，能覆盖整个培养器皿底面的量即可。

2、摇匀液体使其覆盖整个培养器皿的底面。

3、将铺有0.1%明胶的培养器皿放置在超净台至少30min。

4、30 min后弃去明胶，待培养器皿晾干后，即可用于接种细胞。

另：包被明胶的培养器皿在无菌和明胶不蒸干的条件下，可以在4℃保存两周。

成骨诱导分化操作规程：

所需材料：
1、PBS,0.25% Trypsin-EDTA
2、原代MSCs
3、成骨诱导分化培养基

操作方法与步骤：

为了得到最好的诱导结果，请按照以下步骤操作（以六孔板为例）：

1、原代的MSCs分离后，置于37℃，5%CO2培养箱中培养，每2-3天换液或传代。

2、建议使用低代次的MSCs（<8代，随着传代后代次的增加，多向潜能的能力也逐渐降低）。当细胞融合度达到60-80%时，用0.25%Trypsin-EDTA进行消化进行传代。

3、收集细胞，按照5X103cells/cm2的细胞密度接种在预先用明胶包被的六孔板中，每孔培养基2ml，37℃，5%CO2培养。

4、待细胞融合度达到60-70%，开始诱导，小心弃去培养基，并小心沿壁加入37℃预热的成骨诱导分化培养基。

5、每隔3天更换新鲜预热过成骨诱导分化培养基。

6、诱导2周后，为尽可能避免成骨细胞卷边，脱落，每3天全换液更换为每2天半量换液，直至诱导出现大量矿化结节。

注意事项：

为避免成骨细胞卷边，脱落：
1、不要长时间的在培养箱外观察
2、培养基一定要预热
3、避免晃动培养板

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