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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有关mix组分对高浓度模板的扩增影响，，求大神解答
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朱静zz

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关mix组分对高浓度模板的扩增影响，，求大神解答 已有2人参与

自己配置的pcr mix，做了模板浓度梯度进行扩增，其他梯度效果就很好，高浓度的就不好，在不加rox的机器上只是高浓度模板的平台期低，加rox的机器上高浓度模板直接扩不出来是因为什么呀，是mix里什么成分影响吗？这个高浓度模板其实也不是很浓，ct16左右。。。
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1楼 2020-05-26 16:36:20
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
加甜菜碱了吗

发自小木虫Android客户端
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2楼2020-05-27 11:12:09
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soarshining

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
推测你说的高浓度模板，不是通过梯度增加RNA然后在相同体系下反转，而是用反转的cDNA母液进行梯度稀释得到的。而反转体系里面有一些东西对后面的定量PCR反应是有影响的，比如改变了离子浓度、甘油浓度等等。因此cDNA母液一般都需要稀释到1/3~1/4才行。
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3楼2020-05-27 22:24:59
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朱静zz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2020-05-27 11:12:09
加甜菜碱了吗

目前没有加，但之前测试mix组分的时候加过，没有改善就放弃了
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4楼2020-06-03 17:02:29
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朱静zz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by soarshining at 2020-05-27 22:24:59
推测你说的高浓度模板，不是通过梯度增加RNA然后在相同体系下反转，而是用反转的cDNA母液进行梯度稀释得到的。而反转体系里面有一些东西对后面的定量PCR反应是有影响的，比如改变了离子浓度、甘油浓度等等。因此cDN ...

母液是稀释了3倍之后进行浓度梯度测试的
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5楼2020-06-03 17:04:37
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Liu19851225

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主好，请问你模板浓度梯度最低是多少，我现在也想扩增不同浓度梯度的模板，但是不知道引物的量该加多少？
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6楼2020-07-22 19:57:10
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