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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 什么是双荧光素酶？
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我太秀了

铜虫 (小有名气)

[求助] 什么是双荧光素酶？ 已有1人参与

什么是双荧光素酶？
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专注细胞和微生物基因编辑知识分享
1楼 2020-05-26 13:26:52
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2012csc

至尊木虫 (知名作家)
萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶

发自小木虫IOS客户端
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坚持就是胜利！
2楼2020-05-26 14:07:45
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leejsmu

木虫 (小有名气)

年輕的心

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
通过构建两个载体（内参+外显）
外显载体含主报告基因和目的基因，一般采用萤火虫萤光素酶（Firefly）的基因序列+目的基因序列构建
内参载体一般是带有海肾萤光素酶（Renilla）基因序列或者是刺虾（Nanoluc）

将上面两个质粒转染到细胞内，翻译蛋白
然后通过添加两种底物去检测信号值，主报告基因信号值代表目的基因表达量，内参信号值用作归一化处理
大致简单原理这样的
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ole
3楼2020-05-27 15:10:49
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源井生物

铁虫 (初入文坛)
双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。其中荧火虫荧光素是从甲虫（Photinus pyralis）中分离得到，分子量为61kDa；而海肾（Renilla）荧光素酶则是从海肾（Renilla reniformis）中分离，分子量为36kDa。这两种酶的区别之一是他们的底物和辅因子不同：萤火虫荧光素酶需要荧光素、氧气、ATP和镁离子同时存在才能发光；而海肾荧光素酶仅需要腔肠素（coelenterazine）和氧气。萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的区别之二是发光的颜色不同：萤火虫荧光素酶产生的光颜色呈现黄绿色，波长550-570nm；而海肾荧光素酶产生蓝光，波长480nm。正是由于这两种酶的底物和发光颜色不同，所以在双报告实验中得到广泛应用
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4楼2020-05-28 13:39:54
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