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我太秀了

铜虫 (小有名气)

[求助] 什么是双荧光素酶?已有1人参与

什么是双荧光素酶?
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2012csc

至尊木虫 (知名作家)

萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶

发自小木虫IOS客户端
坚持就是胜利!
2楼2020-05-26 14:07:45
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leejsmu

木虫 (小有名气)

年輕的心

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
通过构建两个载体(内参+外显)
外显载体含主报告基因和目的基因,一般采用萤火虫萤光素酶(Firefly)的基因序列+目的基因序列构建
内参载体一般是带有海肾萤光素酶(Renilla)基因序列或者是刺虾(Nanoluc)

将上面两个质粒转染到细胞内,翻译蛋白
然后通过添加两种底物去检测信号值,主报告基因信号值代表目的基因表达量,内参信号值用作归一化处理
大致简单原理这样的
ole
3楼2020-05-27 15:10:49
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源井生物

铁虫 (初入文坛)


双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。其中荧火虫荧光素是从甲虫(Photinus pyralis)中分离得到,分子量为61kDa;而海肾(Renilla)荧光素酶则是从海肾(Renilla reniformis)中分离,分子量为36kDa。这两种酶的区别之一是他们的底物和辅因子不同:萤火虫荧光素酶需要荧光素、氧气、ATP和镁离子同时存在才能发光;而海肾荧光素酶仅需要腔肠素(coelenterazine)和氧气。萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的区别之二是发光的颜色不同:萤火虫荧光素酶产生的光颜色呈现黄绿色,波长550-570nm;而海肾荧光素酶产生蓝光,波长480nm。正是由于这两种酶的底物和发光颜色不同,所以在双报告实验中得到广泛应用
4楼2020-05-28 13:39:54
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