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半定量试验中内参18S问题
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麻烦问下在RNA反转录中使用random与oligo引物各有什么优缺点？ 本人在做半定量PCR时是选用18S作为内参，那为了获得18S的cDNA，在反转录时应该是使用random引物吧？ 但在反转录时我同样使用了oligo引物，后采用18S特异引物扩增，竟然扩增出了我所要的片段，只是扩增出来的条带亮度比我的目的基因特异扩增条带亮度小，这该如何解释？？多谢！ 曾经以为是RNA中有DNA污染，但后来试验证明应该不是，不知如何是好？ 我RNA样品原来是用Oligo-dT引物反转录的，3组样品均得到了自己的目的基因，其中B,C样品有18S条带，A样品无。 今天又使用同样的A,B,C样品RNA，使用随机引物反转录，同样均得到了自己的目的基因，但是18S条带出现情况却不和上面的一致，A，C样品有18S条带，B样品却没有无。 通过A,B样品的两种引物反转录情况，这应该可以得出不是由于DNA污染所致吧，不然两次反转录应该都产生条带才对。 实在纳闷！！！！望高人指点！ |
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